新型人转录因子hBKLF对K562细胞增殖、分化及血红蛋白合成作用的研究.docxVIP

新型人转录因子hBKLFM K562细胞 增殖、分化及血红蛋白合成作用的研 究 【摘要】 孕22周的胎肝是胎儿的 主要造血器官，其中含有大量与造血相关的 调控因子。人碱性 Kr u ppel样因子(human basic Kr u ppel- like factor,hBKLF) 是本 研究室从这一时期胎肝 cDNA文库中新克隆 的转录因子。对其C端的结构分析发现，它 含有3个特征性C2H2锌指结构，因此属于 KLF转录因子家族。前期的表达谱研究工作 显示，hBKLF在成人外周血白细胞、骨髓和 胎肝中表达量高，在红系中有表达，这提示 它可能与造血相关。本研究以 K562细胞为 模型，研究hBKLF与造血细胞增殖、分化及 血红蛋白合成的关系。构建hBKLF正义及反 义真核表达载体，转染 K562细胞，经G418 筛选4周，得到稳定细胞株；用 RT-PCR、 Western blot 方法测定转染后K562细胞 hBKLF表达水平的变化；以转染空质粒的 K562细胞为对照组，在显微镜下直接观察转 染正义质粒和反义质粒的两组细胞形态的 改变；用MTT法比较增殖速率的变化；用甲 基纤维素半固体培养法比较集落形成率的 差别；用苯息丁法观察氯高铁血红素诱导 K562细胞分化后血红蛋白合成水平的差异。 结果表明：正义质粒和反义质粒经 NcoI酶 切鉴定构建正确。转染正义质粒的 K562细 胞中h