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环境毒理学——鱼类毒性试验 环境毒理学——鱼类毒性试验 主要内容 前言 目的与要求 实验原理 3 实验步骤 实验报告 注意事项 7 5 1 2 6 实验材料与实验条件 4 环境毒理学——鱼类毒性试验 1 前言 鱼类是水生食物链的顶级生物，也是水体中最为重 要的经济动物。在污染水体中，当污染物达到一定浓 度时，就会引起鱼类各种中毒反应。在人为控制条件 下，进行各种鱼类毒性实验，不仅用于化学品毒性强 度测定、水体污染程度、废水及其处理效果检查，而 且也为制定水质标准、评价环境质量和管理废水排放 提供科学依据。 环境毒理学——鱼类毒性试验 2 目的与要求 通过本实验，熟悉和掌握鱼类急性毒性试验的设 计、条件、操作步骤，以及试验结果的计算、分析和 报告拟写等全过程。 环境毒理学——鱼类毒性试验 3 实验原理 鱼类对环境反映灵敏 引起中毒 污染物浓度达到一定程度 行为异常 组织细 胞病变 生理功 能紊乱 死亡 环境毒理学——鱼类毒性试验 3 实验原理 死亡率 C 1 C 2 C 3 C 4 C 5 0h 24h 48h 72h 96h 确定半数致死浓度（ 24h LC 50 、 48h LC 50 、 72h LC 50 和 96h LC 50 ），并记录无死亡 的最大浓度和导致鱼类全部死亡的最小实验浓度。鱼类急性毒性试验不仅用于测定 化学物质毒性强度、测定水体污染程度、检查废水处理的有效程度，也为制定水质 标准、评价环境质量和管理废水排放提供环境依据。 表 3-1 不同溶液浓度和不同培养时间下鱼类的死亡率 返回 环境毒理学——鱼类毒性试验 4 实验材料与实验条件 4.1 实验鱼的选择与驯养 对污染物敏感 在生态类群中具有代表性 经济价值比较高 来源丰富、取材方便 遗传稳定、生物学背景资料丰富 体积大小适中 原则 在室内条件下易于饲养和繁殖 斑马鱼是国际上通用的鱼 类急性毒性实验鱼种。本实 验以斑马鱼为实验鱼。建议 的实验温度 21-25 ℃ ，建议 实验鱼的全长 2.0 ± 1.0cm 。 试验前必须驯养（ 健康选 择 ）：相同水质水温的水体 中至少驯养 7d （＜ 2 个月）、 每天换水、每天喂食 1-2 次、 试验前一天应停止喂食、驯 养期间试验鱼死亡率不得超 过 5 ％。 环境毒理学——鱼类毒性试验 4 实验材料与实验条件 4.2 实验仪器设备 （ 1 ）实验容器 实验容器一般用玻璃或其他化学惰性材质制成 的水族箱或水槽。容器的深度必须超过 16cm ，水体表面积越大越 好。同一实验应采用相同规格和质量的容器。为防止鱼类跳出容 器，可在容器上加上网罩。实验容器使用后，必须彻底洗净，以 除去所有毒性残留物。 （ 2 ）其他 溶解氧测定仪、溶解氧控制仪、水硬度计、温度控 制仪、 pH 计、分析天平、分光光度计（六价铬：二苯碳酰二肼分 光光度法）、抄网。 环境毒理学——鱼类毒性试验 4 实验材料与实验条件 4.3 实验溶液的制备 以重铬酸钾为实验毒物，实验溶液的母液由蒸馏水 配制而成。母液最好每日配各 1 次，比较稳定的物质也 可以两日配制 1 次，配好后，最好低温保存。配制好的 母液可以稀释为进行毒性实验的溶液， 以等比或等对 数间距设置浓度系列，相临浓度比值不得超过 2.2 （母 液 3L ， 50g/L 重铬酸钾）。 环境毒理学——鱼类毒性试验 4 实验材料与实验条件 4.4 实验用水（稀释水） 高质量的自然水 标准稀释水 未受污染 的清洁水 天然湖水、河水或地下 水，需要过滤等处理。 实验方法配制 环境毒理学——鱼类毒性试验 4 实验材料与实验条件 4.4 实验用水（稀释水） 溶液中钙离子和镁离子的总和是 2.5mmol/L 。 Ca: Mg 为 4: 1 ， Na : K 为 10:1 。必要时，用氢氧化钠溶液或盐酸调节 pH ，使其稳定在 7.8 ± 0.2 。稀 释用水需经曝气直到氧饱和为止，然后储存备用，在使用前不必再曝气。 环境毒理学——鱼类毒性试验 4 实验材料与实验条件 4.5 水质条件 确保试液温度控制在 23 ℃ ± 1 ℃ 水温 实验液的 pH 在 6.7 ～ 8.5 为宜 pH 至少应保持在 4mg/L 以上，不低于空气饱和值的 60% DO 水的总硬度为 10 ～ 250 mg/L 硬度 以 96h 为宜（至少 24h ） 周期 系统承载量为 1.0g 鱼 /L 溶液 负荷 12-16h/d 光照 环境毒理学——鱼类毒性试验 4 实验材料与实验条件 4.6 实验液更换方式 每隔一定时 间更换一次试 验药液。适用 于试验浓度在 更换试验药液 的时间内保持 相对稳定的物 质。 试验期间不 需更换试验液 ，限于测定那 些化学性质比 较稳定的物质 。 试验药液连 续更新，可用 于大多数物质 ，包括水中不