2021年专题二微生物的培养与应用知识点总结.docVIP

专题二 微生物培养和应用 知识点 2.1 微生物试验室培养 1．培养基是大家根据微生物对营养物质不一样需求，配制出供其生长繁殖营养基质，是进行微生物培养物质基础。 2. 培养基按物理性质分为液体培养基（应用于工业或生活生产）、固体培养基（应用于微生物分离和判定）和半固体培养基（常见于观察微生物运动及菌种保藏等）。按成份分为合成培养基（用成份已知化学物质配制而成，成份种类百分比明确，用于微生物分离判定）和天然培养基（用化学成份不明天然物质配制而成，用于实际工业生产）。按用途分为选择培养基（加入某种化学物质，以抑制不需要微生物生长，促进所需微生物生长）和判别培养基（依据微生物特点，加入某种指示剂或化学药品，来判别不一样类别微生物）。 3.培养基化学成份包含：水、无机盐、碳源、氮源和生长因子等。碳源包含CO2、NaHCO3等无机碳源和糖类、石油、花生粉饼等有机碳源。异养微生物只能利用有机碳源。单质碳不能作为碳源。氮源包含N2、NH3、NO3-、NH4+等无机氮源和蛋白质、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨等有机氮源。只有固氮微生物才能利用N2。 4.培养基还需满足pH、特殊营养物质和氧气要求。例：培养乳酸杆菌需添加维生素；培养霉菌需将pH调至酸性；培养细菌需将pH调至中性或微碱性；培养厌氧型微生物需提供无氧条件。 5.无菌操作技术包含：①对试验操作空间、操作者衣着和手，进行清洁和消毒。②将用于微生物培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。③为避免周围环境中微生物污染，试验操作应在酒精灯火焰周围进行。④试验操作时应避免已经灭菌处理材料用具和周围物品相接触。 6.消毒和灭菌区分是：消毒指使用较为温和物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害微生物（不包含芽孢和孢子），包含煮沸消毒法，巴氏消毒法 （酒精、氯气、石炭酸）和紫外线消毒法。灭菌指使用强烈理化原因杀死物体内外全部微生物，包含芽孢和孢子，包含灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌。 7.灭菌方法：①接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法；②玻璃器皿、金属用具等使用干热灭菌法，所用器械是干热灭菌箱；③培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法，所用器械是高压蒸汽灭菌锅；④表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法，所用器械是紫外灯 。 8.制作牛肉膏蛋白胨固体培养基 （1）方法步骤：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。 （2）倒平板操作步骤包含：①将灭过菌培养皿放在酒精灯火焰旁桌面上，右手拿装有培养基锥形瓶，左手拔出棉塞。②将锥形瓶瓶口快速经过火焰（灼烧灭菌，预防瓶口微生物污染培养基）。③将培养皿打开一条稍大于瓶口缝隙，再将锥形瓶中培养基（约10～20mL）倒入培养皿，立即盖上培养皿皿盖。④等候平板冷却凝当然后，将平板倒过来放置，使培养皿盖在下、皿底在上（目标：使培养基表面水分愈加好地挥发，又能够预防皿盖上水珠落入培养基，造成污染）。 9.倒平板时若不慎将培养基溅在皿盖和皿底上，则这个平板不能用来培养微生物，原因是空气中微生物会在皿盖和皿底上生长。 10.纯化大肠杆菌原理是：用平板划线法和稀释涂布平板法接种，使聚集在一起微生物分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个菌落（生态学上称种群），以达纯化菌种目标。 11.平板划线操作时第一步和每次划线之前全部要灼烧接种环原因是：前者避免接种环上可能存在微生物污染培养物，后者杀死上次划线残留在环上菌种，使菌种逐步变少方便得到单个菌落。在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环原因是立即杀死接种环上残留菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。在灼烧接种环以后，要等其冷却后再进行划线原因是避免接种环温度太高而杀死菌种。 12.涂布平板操作步骤包含：①将涂布器浸在盛有酒精烧杯中。②取少许菌液，滴加到培养基表面。 ③将沾有少许酒精涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却8～10s。④用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。 13.菌种保留：频繁使用，临时保留接种到固体斜面培养基，在4℃下保留。长久保留菌种用甘油管藏方法。 2.2 土壤中分解尿素细菌分离和计数 1.尿素是关键农业氮肥，不能直接被植物吸收。土壤中有一类细菌能合成脲酶，将尿素分解成氨，被植物吸收利用。尿素最初是从人尿液中发觉。 2.试验室中微生物筛选原理是：人为提供有利于目标菌株生长条件（包含营养、温度、PH等），同时抑制或阻止其它微生物生长。 3.在微生物学中，将许可特定种类微生物生长，同时抑制或阻止其它种类微生物生长培养基，称作选择培养基。比如，培养基中不加入有机物能够选择培养自养微生物；培养基中不加入氮元素，能够选择培养能固氮微生物；加入高浓度食盐可选择培养金黄色葡萄球菌等。 4.测定微生物数量常见方法有稀释涂布平板法和显微镜直接计数。 5.稀释涂布平板法常见来统计样品中活菌数目。原理是：当样品稀释度足够高时，