愈创木酚法测定过氧化物酶活性(准确,无误).docxVIP

愈创木酚法测定过氧化物酶活性 一、实验目的 过氧化物酶它与呼吸作用、光合作用及生长素的氧化等都有密切关系，在植物生长发育过程中，它的活性可以反映某一时期植物体内代谢的变化。通过本实验了解过氧化物酶的作用，掌握愈创木酚法测定过氧化物酶。 二、实验原理 在过氧化物酶（ POD）催化下， H2O2 将愈创木酚氧化成茶褐色产物。此产 物在 470nm 处有最大光吸收值，故可通过测 470nm 下的吸光度变化测定过氧 化物酶的活性。 三、实验材料 马铃薯块茎。 四、设备与试剂 分光光度计，离心机，研钵，容量瓶，量筒，试管，吸管。 0.05 mol L·的磷酸缓冲液（ pH 5.5）； 0.05 mol L·愈创木酚溶液； 2％H2O2； 20％三氯乙酸 五、实验步骤 （一）酶液的制备 取 1.0～5.0 g 洗净去皮的马铃薯块茎，切碎，放入研钵中，加适量的磷酸缓冲液研磨成匀浆。将匀浆液全部转入离心管中，于 3000×g离心 10 min，上清液转入 25 mL 容量瓶中。沉淀用 5 mL 磷酸缓冲液再提取两次，上清液并入容量瓶中，定容至刻度，低温下保存备用。 （二）过氧化物酶活性测定 酶活性测定的反应体系： 1 / 2 依次加入 2.9 mL 0.05 molL-·1磷酸缓冲液； 1.0 mL2％H2O2；1.0 mL 0.05 mol ·L-1 愈创木酚和 0.1 mL 酶液。用加热煮