酶的固定化技术及其发展.docVIP

酶的固定化技术及其的发展 【摘要】 随着工业生物技术和酶工程的不断发展，酶在各个领域的广泛发展，对酶的要求也越来越严格。酶的固定化在酶工程中占有重要地位，它的出现促进了酶的工业化应用。本文将重点阐述酶固定化方法，并谈谈酶固定化的应用和发展趋势。 【关键字】 酶 固定化技术 发展 【前言】 酶是一类具有生物催化性质的高分子物质，其催化性具有专一性强、催化效率高和作用性质温和等特点。但是在实际工业生产中，由于实际的环境因素，应用酶的过程中出现一些不足：①催化效率低，②稳定性能差，③不能多次使用，④产物的分离纯化比较困难。为此人们开始针对酶的这些不足寻求改善方法，方法之一就是酶的固定化。将酶固定化以后，既保持了酶的催化特性，又克服了游离酶的不足之处，使其具有一般化学催化剂能回收反复使用的优点，并在生产工艺上可以实现连续化和自动化。 酶的固定化是20世纪60年代开始发展起来的一项新技术。对酶的固定化研究主要是将酶与水不溶性载体结合起来，成为不溶于水的酶衍生物，最初曾称为水不溶酶（water insoluble enzyme ） 和固相酶（solid phase enzyme ）。所以在1971 年召开的第一届国际酶工程会议上，建议采用统一的英文名称Immobilized Enzyme 。用于固定化的酶，起初都是采用经提取和分离纯化后的酶， 但是随着理论与技术的发展，后来发现也可以将溶解状态的酶固定在一个有限的空间使其不能自由移动，也能达到固定酶的作用。 酶的固定化是用固体材料将酶束缚或限制于一定区域内,进行其特有的催化反应,并可回收及重复利用的技术.[1] 该技术使得酶在保持其高效、专一、温和及酶的活性可调节控制等酶催化反应特性以外。还有分离回收容易、可重复多次使用、操作连续及可控、工艺简便等一系列优点。[2]有效地促进了酶的工业化应用。在接下来的几十年里人们又不断进行研究，在固定化方法，固定载体以及固定化酶的应用等方面都取得了不少新成果。 目前， 固定化酶技术已应用于食品工业、 医学分析 、环保技术、 三废处理等领域， 已经取得了许多重要成果，充分发挥了固定化酶和固定化细胞在改革工艺和降低成本方面的巨大潜力。从目前的发展状况来看，尽管酶种类繁多，但已经固定化的酶却相对有限，采用固定化酶技术大规模生产的企业尚属少数，真正在工业上使用的固定化酶还仅限于葡萄糖异构酶、葡萄糖氧化酶和青霉素酰化酶等为数不多的十几个酶种，故仍需大力研究开发使更多的固定化酶和细胞能适用于工业规模生产。本文将从酶固定化方法、 固定化酶的特性及应用三个方面对酶固定化的研究进展做一综述。 【正文】 一、酶的固定化技术 采用各种方法，将酶固定在水不溶性的载体上，制备成固定化酶的过程称为酶的固定化（enzyme immobilization）。酶的固定化方法很多，一般有吸附法、包埋法、交联法。 吸附法 交联法 包埋法 吸附法 吸附法是指利用各种吸附剂将酶或含酶菌体吸附在其表面上而使酶固定的方法。通常有物理吸附法和离子吸附法。但是酶与载体结合不牢，所以使用受到一定限制。[3] 常用吸附剂有 活性炭、 氧化铝、 硅藻土、 多孔陶瓷、多孔玻璃等。 在近些年的研究中，人们通过采用新的载体，优化反应条件，或与其他方法结合使得酶不易脱落，稳定性提高，活力回收率也不断提高。比如说，纵伟、刘艳芳等以磁性壳聚糖微球作为新型载体，采用物理吸附法固定化脂肪酶进行研究。[4] 2、交联法 交联法是指依靠双功能团试剂使酶分子之间发生交联凝集成网状结构，使之不溶于水从而形成固定化酶。比如说，陈姗姗等以阴离子交换树脂为载体、戊二醛为交联剂，对果胶酶进行固定化分析。[5] 常用的交联剂是戊二醛，但单用戊二醛等试剂交联制备的固定化酶活力损失较大，且固定化酶颗粒较小，使用不便，因此常采用将此法与吸附法、包埋法结合的双重固定化法，可以达到既提高固定化酶的活力，又起到加固的效果。比如说，王伟、杨开伦等以壳聚糖为载体，戊二醛为交联剂，用吸附交联法对氨基酰化酶进行了固定化；[6]刘颖、高晗等利用上述混合方法，将杏仁来源的B一葡萄糖苷酶以吸附法固定在用戊二醛交联的壳聚糖上，并对固定化条件进行优化。[7] 3、包埋法 包埋法是指将酶或酶菌体包埋在多孔载体中，使酶固定化的方法。通常有凝胶包埋法和微囊化法。比如说，王炎等以介孑L分子筛MCM一41作为载体，采用物理吸附法对漆酶进行了固定化。[8] 酶经过固定化后，比较能耐受温度及pH的变化，最适pH往往稍有移位，对底物专一性没有任何改变，实际使用效率提高几十倍。 二、固定化的酶的特性