食品微生物控制技术 形态学检验 第6讲-微生物的快速检测.pptVIP

GB/T 4789.3-2010 食品微生物学检验大肠菌群计数 例如： 10-4样品稀释液1mL在VRBA平板上有100个可疑菌落，挑取其中10个接种BGLB肉汤管，证实有6个阳性管，则该样品的大肠菌群数为：6.0×105 CFU/g 纸片法是在实践工作中研制并不断完善起的一种快速简便的检测方法，它是将乳糖、蛋白胨等营养成加上溴甲酚紫、氯化三苯甲基四氮唑(TTC)作为指示剂，浸纸片，37℃或40℃烘干，无菌封装，置冰箱备用。 大肠菌群的速测技术 3.纸片法检测食品中的霉菌及酵母菌 三、酶联免疫吸附法快速检测 1.食品原料中沙门氏菌的酶联免疫吸附法快速检测 沙门氏菌是大多数食源性疾病发病的主要原因，是一类广泛分布于自然界肠杆菌科中一种重要的人畜共患、革兰阴性病原菌。 GB4789.4-94标准检测方法主要是根据沙门氏菌的生化特性进行前增菌、选择性增菌、分离培养、生化鉴定和血清分型五个步骤，需时至少4～7d才能得出明确的诊断结果。 酶联免疫吸附法采用抗原与抗体特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定，准确快速。 酶联免疫吸附法 实验步骤 （1）加样，加稀释的待测样品0.1ml于已包被反应孔中，置37℃孵育1小时，然后洗涤，同时做空白孔，阴性对照及阳性对照孔。 （2）加酶标抗体，于各反应孔中，加入酶标抗体0.1ml，37℃孵育0.5～1小时，洗涤。 （3）加底物液显色，于反应孔中加入底物溶液0.1ml，37℃孵育10～30分钟。 （4）终止反应，于各反应孔中加入2Ｍ硫酸0.05ml （5）结果测定，置于酶标仪上测定各孔的OD值，并记录结果，读数在加终止液10分钟内完成。 结果判定： 和对照比较，根据显色读书来判定是否含有沙门氏菌 四、胶体金免疫层析法快速检测 案例 北京同仁堂检出黄曲霉毒素 　 2017-08-22国家食药监总局发布了《关于9批次中药饮片不合格的通告》。通告称，经重庆市食品药品检验检测研究院检验，标志为北京同仁堂(亳州)饮片有限责任公司等9家企业生产的9批次中药饮片不合格，不合格项目为黄曲霉毒素。目前，相关监管部门已采取查封扣押等控制措施，要求企业暂停销售使用、召回产品，并进行整改。 1.黄曲霉毒素的胶体金快速检测 采用免疫竞争法分析原理结合胶体金标记技术进行检测 五、荧光定量快速检测 1.小麦中赭曲霉毒素A荧光定量快速检测 赭曲霉毒素A普遍存在于谷物及制品、牛奶、咖啡、香料、酒类和中草药及其制剂中，可导致人类及动物体内毒素的蓄积。赭曲霉毒素A具有很强的肝脏毒性和肾脏毒性，并会使动物致畸、致突变和致癌。 荧光染料不结合单链核苷酸，仅识别并结合双链DNA的螺旋结构，继而释放荧光。当荧光染料浓度一定时，反应体系中加入不同浓度的赭曲霉毒素A，则反应液中的荧光强度不同，从而达到快速定量检测的目的。 实验步骤 准确称取5.0g待测样品于50mL离心管中，加入25mL 70%甲醇溶液。振荡提取5～7 min，静置3min, 过滤得上清液。取600μL室温下的样品稀释液与100μL上清液涡旋混合，即为待测溶液。 将检测卡平放，用移液器定量吸取 100μL 待测液加入 600μL 样本稀释液中，反复吸打至 5 次，使其充分混和均匀，再吸取 100μL 此混合液垂直滴加于荧光定量检测卡的加样孔中，计时 10 min 将检测卡放入荧光免疫层析检测仪中，进行检测。仪器读数完成后会自动计算出被检样本中的赭曲霉毒素 A含量。 六、常见致病菌的快速检测 金黄色葡萄球菌的速测技术 单增李斯特菌的快速检测 请你来查！ 金黄色葡萄球菌的速测技术 金黄色葡萄球菌快速检测卡基于双抗体夹心法胶体金免疫层析技术，制备针对金黄色葡萄球菌菌壁的标记性蛋白的单克隆抗体，通过胶体金标记技术标记抗体与包被在NC膜上的另一抗体组装成检测卡，30分钟可检测速冻面食制品、冻肉中的金黄色葡萄球菌。本产品 6－12 小时即可快速检测其他各类食品中金黄色葡萄球菌。 课堂小结 1.开展微生物快速检测工作的意义 2.纸片法快速检测 3.酶联免疫吸附法快速检测 4.胶体金免疫层析法快速检测 5.荧光定量快速检测 课后思考 食品餐具上的微生物能否用快速检测法进行检测，有哪些方法？ 食品安全快速检测技术 食品质量与安全专业 课前回顾 一、水分速测技术 二、蛋白质和氨基酸态氮速测技术 三、脂肪的快速测定 四、酸价和过氧化值速测技术 上节课思考 植物油中酸价和过氧化值的国家标准检验方法是什么？ GB/T 5530-2005 动植物油脂 酸值和酸度测定 热乙醇滴定法 冷溶剂法 电位滴定法 GB/T 5538-2005 动植物油脂 过氧化值测定 硫代硫酸钠滴定 第六章 食品安全微生物指标速测技术 课