流式常用试剂配制.pdfVIP

流式常用试剂配制 一、流式细胞术常用试剂 3 1、10％NaN ：将 10gNaN3 溶解于 100ml 蒸馏 水中，室温保存； 活体实验或在辣根过氧化酶反 应中可不使用 NaN3 。 2、3％BSA/PBS ：100ml PBS 中加入 3g BSA ， 使之溶解，再加入 0.2ml 10 ％的 NaN3 。 2 2 3、500mmol/L EDTA ：将 186g EDTA?Na ?2H O 溶解于 400ml 蒸馏水中，用 NaOH 将 PH 调至 8.0，补充蒸馏水至 500ml ，分装，高压灭菌，室 温保存。 4、4 ％多聚甲醛：在磁力搅拌下，将 4g 多聚甲 醛溶于 100ml PBS，加入数滴 NaOH ，在通风柜 中于 60 度加热，使其溶解，调整 PH 至 7.4，使 用前新鲜配制。 5、消化液： 0.25％胰蛋白酶（用培养液或 PBS 配制）或 0.25％胰蛋白酶与 0.02％ EDTA 的混 合液。 4 3 6、红细胞裂解液： NH Cl 4.16g ，KHCO 0.5g， EDTA?2Na 0.02g，溶于 100ml 水中，调 PH 至 7.2，补充蒸馏水至 500ml ，4 度储存，使用时需 恢复至室温。 7、流式细胞抗体稀释剂： 0.1mmol/L PBS 液 （PH 2 3 7.4）＋1％BSA ＋0.1％Na N 。 8、常用细胞破膜剂： PBS 液 （PH 7.4 ）＋1％FBS （或BSA ）＋0.1％NaN3＋0.1％saponin （Sigma 的效果不错）。 9、流式细胞染色洗涤液：含 2 ％的 BSA 、0.1％ NaN3 的 PBS （PH 7.4 ）。 10、PI 染液（保存液， 10×，用于细胞周期和凋 亡检测）：10mg PI 溶于 10ml PBS，加入 2mg 无 DNA 酶的 RNA 酶，4 度保存备用。应用时， 10 倍稀释，每管加 0.3ml～0.5ml PI 染液。 11、Hanks 液的配制（ BSS，主要用于培养液、 稀释剂和细胞清洗液， 不能单独作为细胞、 组织 培养液） 原液 A NaCl 160g 4 2 MgSO ?7H O 2g KCl 8g 2 MgCl?6H O 2g 2 CaCl 2.8g 溶于 1000ml 双蒸水 原液 B 2 4 2 1）Na HPO ?12H O 3.04g KH 2PO4 1.2g 葡萄糖 20.0g 溶于 800ml 双蒸水 2 ）0.4％酚红溶液：取酚红 0.4g 置玻璃研钵中， 逐滴加入 0.1N NaOH 并研磨，直至完全溶解， 约加入 0.1N NaOH 10ml 。将溶解的酚红吸入 100ml 量瓶中， 用双蒸水洗