生物化学与分子生物学：第二章 核酸的结构与功能.pptVIP

部分变性DNA的电镜图像 DNA的增色效应： 在DNA解链过程中，由于有更多的共轭双键得以暴露，溶液OD260随之增加的现象。 DNA解链时的紫外吸收变化 （熟悉） 解链温度(Tm)： DNA的热变性解链过程中，紫外光吸收值达到最大值的50%时的温度。 Tm值与DNA分子中的G+C含量及分子大小呈正比。 Tm时，DNA分子中50%的 双链结构被解开。 （二）DNA的复性 定义：（掌握） 缓慢去除变性条件，变性DNA链会自发互补配对，恢复原来的双螺旋结构，这一过程称为复性。 减色效应 DNA复性时，其溶液OD260降低。 热变性的DNA经缓慢冷却后即可复性，这一过程称为退火。 The denaturation and renaturation of double-stranded DNA molecules 三、核酸分子杂交 原理：DNA变性、复性 不同来源的单链核酸，通过互补序列，结合形成双链结构的杂交体，此过程称为核酸分子杂交。 杂化双链可以在不同的DNA与DNA之间形成，也可以在DNA和RNA分子间或者RNA与RNA分子间形成。 核酸分子杂交 研究DNA分子中某一种基因的位置。 监定两种核酸分子间的序列相似性。 检测某些专一序列在待检样品中存在与否。 核酸分子杂交的应用 PCR技术 模板DNA 扩增1次 扩增2次 扩增3次 扩增4次 聚合酶链式反应 (Polymerase Chain Reaction)，简称PCR，是一种分子生物学技术，用于放大特定的DNA片段。可看作生物体外的特殊DNA复制。 第五节 核酸酶（自学） Nuclease 依据底物不同分类 DNA酶(deoxyribonuclease, DNase)： 专一降解DNA。 RNA酶 (ribonuclease, RNase)： 专一降解RNA。 依据切割部位不同 核酸内切酶：分为限制性核酸内切酶和非特异性限制性核酸内切酶。 核酸外切酶：5′→3′或3′→5′核酸外切酶。 核酸酶是指所有可以水解核酸的酶。 5’ 5’ 3’ 3’ 外切位点 外切位点 内切位点 内切位点 参与DNA的合成、修复以及RNA的剪接。 清除多余的、结构和功能异常的核酸，以及侵入细胞的外源性核酸。 降解食物中的核酸。 体外重组DNA技术中的重要工具酶 。 核酸酶的功能 两种最重要的生物大分子比较 组成单位 氨基酸 核苷酸 种 类 20种 A、C 、G 、T (DNA) A、C 、G 、U (RNA) 连接方式 肽键 3′,5′磷酸二酯键 一级结构 AA排列顺序 碱基序列 空间结构 二、三、四 螺旋、超螺旋、蛋白 级结构 -核酸非共价结合 功 能 生命活动 遗传信息贮存、传代、 直接执行者 表达,决定蛋白结构 蛋白质 核酸 Classification of nucleic acid Ribonucleic acid (RNA) is composed of ribonucleotides. in nuclei and cytoplasm participate in the gene expression Deoxyribonucleic acid (DNA) is composed of deoxyribonucleotides. 90% in nuclei and the rest in mitochondria store and carry genetic information; determine the genotype of cells nucleic acid nucleotides phosphate nucleosides pentose bases Molecular Constituents Nucleic acid can be hydrolyzed into nucleotides by nucleases. The hydrolyzed nucleic acid has equal quantity