生物技术制药：6 酶工程制药-1.pptVIP

* （4）PH的确定与调节控制 最适PH 在操作过程中，有时需要用酸或碱来调节反应液PH。如果局部的pH过高或过低，就会引起酶的失活，或者使底物和产物发生水解反应。这时，可用加快搅拌已促使混合均匀。 * （5）搅拌速度的确定与调节控制 混合均匀，有效碰撞 搅拌过慢，影响混合均匀性，过快，剪切力过大 * （6）流动速度的确定与调节控制 连续式酶反应器中，控制好流速，保证混合均匀，过慢，酶颗粒沉积，阻塞；过快，流动状态过乱，固定化酶结构破坏，脱落，流失 填充床式，流速越慢，酶与底物接触时间越长，反应越完全，但生产效率低，过快，影响转化效率 膜反应器，容易产生浓差极化阻塞膜孔，需搅拌和控制流速 * 2.酶反应器应用的注意事项 （1）保持酶反应器的操作稳定性：一定时间后，检查酶活力，进行补充和替换 （2）保持流体的流动方式和状态：流动状态的改变，会影响酶与底物，产物的接触 （3）防止酶的变性失活:控制温度，PH，金属离子，剪切力 * （4）防止微生物污染：一般不必严格无菌操作，但底物与产物为营养物时，需防微生物污染。 一般要符合必要的卫生条件，生产药用或食品酶时，卫生条件要求较高 * 措施： 要求环境清洁， 反应器使用前后进行清洗和消毒 严格管理，经常检测 加消毒剂等 采用较高温度和低的PH * 3.生产能力的下降及对策 酶反应器操作中，生产能力逐渐降低，主要原因是固定化酶活性降低或损失。造成固定化酶活性损失的原因： （1）酶本身的失活； （2）酶从载体上脱落； （3）载体的破碎或溶解。 * 固定化酶产品介绍 (1)氨基酰化酶：这是世界上第一种工业化生产的固定化酶，可以用于生产各种L-氨基酸药物。 1969年，日本田边制药公司将从米曲霉中提取分离得到的氨基酰化酶，用DEAE-葡聚糖凝胶为载体通过离子键结合法制成固定化酶，将L-乙酰氨基酸水解生成L-氨基酸，用来拆分DL-乙酰氨基酸，连续生产L-氨基酸。剩余的D-乙酰氨基酸经过消旋化，生成DL-乙酰氨基酸．再进行拆分。生产成本仅为用游离酶生产成本的60％左右。 * 固定化酶法生产L-氨基酸 乙酰-DL－Ala 　L－Ala+乙酰-D－Ala Aminoacylase 氨基酰化酶 * 泵 储 罐 反应产物 离心机 消旋反应器 固定化酶柱子 DEAE-葡聚糖 －氨基酰化酶 晶体 L-Ala L-Ala A-D-Ala A-L-Ala A-D-Ala * (2)天门冬氨酸酶：1973年日本用聚丙烯酰胺凝胶为载体，将具有高活力天门冬氨酸酶的大肠杆菌菌体包埋制成固定化天门冬氨酸酶，用于工业化生产，将延胡索酸转化生产L-天门冬氨酸。 1978年以后，改用角叉菜胶为载体制备固定化酶，也可将天门冬氨酸酶从大肠杆菌细胞中提取分离出来，再用离子键结合法制成固定化酶，用于工业化生产。 * (3)天门冬氨酸脱羧酶：将含天门冬氨酸脱羧酶的假单胞菌菌体，用凝胶包埋法制成固定化天门冬氨酸脱羧酶，于1982年用于工业化生产，催化L-天门冬氨酸脱去羧基，生产L-丙氨酸。 * (4)青霉素酰化酶：是在药物生产中广泛应用的一种固定化酶。可用多种方法固定化。1973年已用于工业化生产，用于制造各种半合成青霉素和头孢菌素。 用同一种固定化青霉素酰化酶，只要改变pH等条件，就既可以催化青霉素或头孢菌素水解生成6一氨基青霉烷酸(6一APA)或7一氨基头孢霉烷酸(7一ACA)，也可以催化6一APA或7一ACA与其他的羧酸衍生物进行反应，以合成新的具有不同侧链基团的青霉素或头孢霉素。 * 固定化细胞法生产6-氨基青霉烷酸 青霉素酰化酶与抗生素改造 * * * E.Coli 斜面 细胞 固定化细胞 青霉素G 转化液 滤液 6-APA 粗品 培养 固定 转化 过滤 抽提 1.技术路线 * 青霉素酰化酶转化流程图 * 二、固定化酶（细胞）的性质与指标 1、固定化酶的形状 （1）颗粒状：包括酶珠、酶块、酶片、酶粉。每种固定化方法均可制备颗粒状，方法简单，比表面积大，转化效率高，适用各种反应器。如酵母酶珠。 （2）纤维状：三醋酸纤维素用适当的溶剂溶解后与酶混合，再用喷丝的方法就可制成酶纤维。比表面积大，转化效率高，但只适用于填充床反应器。此外，纤维酶可以织成酶布用于填充床反应器。 * （3）膜状固定化酶：可通过共价结合的方法将酶偶联在滤膜上。也可用其他方法制膜酶。酶膜比表面积大，渗透阻力小，可用于酶电极，破碎后也可用于填充床。目前已有木瓜酶、葡萄糖氧化酶