最新整理第二十五章病毒感染的实验室诊断与防治原则教学文案.docxVIP

第二十三章 病毒感染的实验室诊断与防治原则 第一节 实验室诊断 病毒感染的实验室检查包括病毒分离与鉴定、 病毒核酸与抗原的直接检出以 及特异性抗体的检测。 临床医师根据流行病学资料， 疾病的症状与体征综合判断 可能为何种病毒感染，留取适宜的标本送检。 一、检材的采集与送检 病毒性疾病通常采集血液、 鼻咽分泌液、 咯痰、粪便、脑脊液、疱疹内容物、 活检组织或尸检组织等。 供分离病毒、检出核酸及抗原的标本的，要求： （一）尽早采取 在发病初期（急性期）采取，较易检出病毒，越迟阳性率越低。 （二）部位适宜 由感染部位采取，如呼吸道感染采取鼻咽洗漱液或咯痰； 肠道感染采取粪便； 脑内感染采取脑脊液；皮肤感染采取病灶组织；有病毒血症时采取血液。 （三）冷藏速送 病毒离活体后在室温下很易死亡， 故采得检材应尽快送检。 若距离实验室较 远，应将检材放入装有冰块或干冰的空器内送检。 病变组织则应保存于 50%的甘 油缓冲盐水中。污染检材，如鼻咽分泌液、粪便等应加入青霉素、链霉素或庆大 毒素等，以免杂菌污染细胞或鸡胚，而影响病毒分离。 检测特异性抗体需要采取急性期与恢复期双份血清， 第一份尽可能在发病后 立即采取，第二份在发病后2?3周采取。血清标本放4C-20C保存，试验前血 清标本以56°C 30分钟处理去除非特异性物质及补体。无菌性脑炎患者也可取脑 脊液检测特异性 lgM 。 表 23-1 病毒检材采集与检验结果的关系 采取标本的时期 检查病毒及其成分 测定抗体 期 潜伏期及前驱 刚发病或急性 较难查见 未增多 期 期 最多查见 未增多或增多不明显 恢复期及康复 很难查见 明显增多（常超过 4倍） 表 23-2 供病毒分离的检材 临床表现 常见病毒 帮助诊断有用的检材 腺病毒 咽试、肛拭 呼吸道感染 巨细胞病毒 咽试或含漱液、尿液 流感病毒 咽拭或含漱液  副流感病毒 呼肠孤病毒 合胞病毒 咽拭含漱液 咽拭、粪便或肛拭 咽拭或含漱液、鼻咽洗液 出疹疾病 柯萨奇病毒 巨细胞病毒 埃可病毒 EB 病毒 单纯疱疹病毒 麻疹病毒 风疹病毒 水痘带状疱疹病 毒 粪便或肛拭、咽拭 咽拭或含漱液、尿液 粪便或肛拭、咽拭 咽拭或含漱液 病灶棉拭或吸取液、咽拭 咽拭或含漱液、尿液 咽洗液、鼻咽拭 病灶棉拭或吸取液、咽拭 脑炎 虫媒病毒 单纯疱疹病毒 麻疹病毒 脊髓灰质炎病毒 血液、脑脊液 脑活检、 脑脊液、 疱疹棉拭或吸取 液 脑脊液、咽拭或含漱液、尿液 粪便或肛拭、咽拭、脑脊液 柯萨奇病毒 脑脊髓液、粪便或肛拭、咽拭 无菌性脑膜炎 埃可病毒 脑脊液、粪便或肛拭、咽拭 腮腺炎病毒 脑脊髓液、口颊粘膜棉拭 巨细胞病毒 尿液、咽拭或含漱液 失天或新生儿感染 风疹病毒 咽拭或含漱液、尿液 单纯疱疹病毒 病灶棉拭或吸取液、回拭 腺病毒 单纯疱疹病毒 结膜棉拭、咽拭、肛拭 眼部感染 结膜棉拭、 病灶棉拭或吸取液、 咽 拭 其它感染 巨细胞病毒 尿液、咽拭 巨细胞包涵体疾病 巨细胞病毒 尿液、咽拭 单核细胞增多综合 EB 病毒 咽拭或洗液 征 柯萨奇 B 病毒 心包液、粪便、咽拭 心包炎、心肌炎 埃可病毒 心包液、粪便、咽拭 二、病毒的分离与鉴定 （一）病毒的分离 病毒分离的一般程序是： 易感的动物 检验标本T杀火杂菌 T鉴定病毒种型 T出现病状 （青、链霉素）-接种 加出病宀卄（血清学方法） 鸡胚—病变 或死亡 细胞培养一 细胞病变 无菌标本 （脑脊液、血液、血浆、血清 ）可直接接种细胞、动物、鸡胚；无菌 组织块经培养液洗液洗涤后制成10?20%悬液离心后，取上清接种；咽洗液、粪 便、尿、感染组织或昆虫等污染标本在接种前先用抗生素处理，杀死杂菌。 1 .细胞培养 用分散的活细胞培养称细胞培养（Cell culture）。所用培养液 是含血清（通常为胎牛血清） 、葡萄糖、氨基酸、维生素的平衡溶液， pH7.2? 7.4。细胞培养适于绝大多数病毒生长，是病毒实验室的常规技术。 原代细胞培养 （Primary cell culture） 用胰蛋白酶将人胚 （或动物） 组织分散成 单细胞，加一定培养液，37C孵育1-2天后逐渐在培养瓶底部长成单层细胞，如 人胚肾细胞、兔肾细胞。原代细胞均为二倍体细胞，可用于产生病毒疫苗，如兔 肾细胞生产风疹疫苗， 鸡成纤维细胞产生麻疹疫苗， 猴肾细胞生产脊液灰质炎疫 苗。因原代细胞不能持续传代培养，故不便用于诊断工作。 二倍体细胞培养 （Diploid cell cultune） 原代细胞只能传 2-3代细胞就退化， 在 多数细胞退化时， 少数细胞能继续传下来， 且保持染色体数为二倍体， 称为二倍 体细胞。二倍体细胞生长迅速，并可传 50 代保持二倍体特征，通常是胚胎组织 的成纤维细胞（如 WI-38 细胞系）。二倍体细胞一经建立，应尽早