细菌药敏试验及其耐药表型检测(课堂PPT).pptVIP

 葡萄球菌属 – 青霉素  方法 敏感 中介 耐药 MIC ?0.12 ?g/ml - ?0.25 ?g/ml 纸片扩散法 ?29 mm - ?28 mm CLSI M100-S20. Table 2C. * 诱导β-内酰胺酶试验 苯唑西林 (诱导剂) 接种纯菌落于琼脂上 (例如，BAP, MHA) ； 贴?-内酰胺类纸片 (例如,苯唑西林, 头孢西丁)； 孵育过夜； 测试抑菌圈周围的细菌； 如果β-内酰胺酶阳性,报告青霉素R。 Pos Neg * 超广谱β-内酰胺酶（ESBLs） ESBLs是指由质粒介导的能水解青霉素类、头孢菌素类和单环?内酰胺类氨曲南的一类酶； ESBLs不能水解头霉素类和碳青霉烯类药物，能被克拉维酸、舒巴坦和他唑巴坦等?内酰胺酶抑制剂所抑制； ESBLs主要见于大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌，此外也见于肠杆菌属、枸橼酸杆菌属、变形杆菌属、沙雷菌属等其他肠杆菌科细菌、不动杆菌、铜绿假单胞菌。 * 超广谱β-内酰胺酶（ESBLs） 纸片法，出现以下一种情况即可怀疑该菌株产生ESBL （筛选阳性）： 头孢泊肟≤17mm 头孢他啶≤22mm 头孢噻肟≤27mm 头孢曲松≤25mm 氨曲南 ≤27mm * 超广谱β-内酰胺酶（ESBLs） 纸片法（表型确认试验） 头孢他啶和头孢他啶/克拉维酸、头孢噻肟和头孢噻肟/克拉维酸。 任一复方制剂的抑菌圈直径与相应单药抑菌圈直径相差≥5mm时，即可判断该菌产ESBL。 * 超广谱β-内酰胺酶（ESBLs） 稀释法，出现以下一种情况即可怀疑该菌株产生ESBL： 头孢他啶或头孢噻肟或头孢曲松或氨曲南MIC≥2mg /mL 或头孢泊肟MIC≥8mg /mL * 超广谱β-内酰胺酶（ESBLs） 稀释法（表型确认试验） 头孢他啶和头孢他啶/克拉维酸、头孢噻肟和头孢噻肟/克拉维酸。 任何一组酶抑制剂复方制剂的MIC值比相应单药的MIC降低3个稀释度者即可判定该菌为产ESBL菌株。 * AmpC酶的特征 AmpC酶是在革兰阴性菌中发现的由染色体或质粒介导的水解头孢菌素的Ⅰ型β内酰胺酶，可分为诱导酶和非诱导酶。 与ESBLs不同的是，AmpC酶对三代头孢菌素耐药但对四代头孢菌素敏感且不被酶抑制剂克拉维酸所抑制，但其酶活性可被氯唑西林和硼酸抑制。 * AmpC酶的检测方法 头孢西丁三维试验是检测AmpC酶的经典方法； 除此之外，还有以硼酸化合物为抑制剂检测肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的AmpC酶、AmpC Disk、头孢西丁琼脂基础法等。 * 碳青霉烯酶 碳青霉烯酶可以定义为具有水解碳青霉烯类抗生素活性的β-内酰胺酶，主要分布于β-内酰胺酶A、B、D类中。 根据水解机制中作用位点的不同可以将碳青霉烯酶分为两大类： 一类称为金属碳青霉烯酶，这类酶以金属锌离子为活性作用位点，可以被EDTA抑制，属于B类β-内酰胺酶； 另一类以丝氨酸（Ser）为酶的活性作用位点，可以被酶抑制剂克拉维酸和他唑巴坦所抑制，属于A、D类β-内酰胺酶。 * 碳青霉烯酶 A类酶 B类酶 D类酶 染色体编码：SME NMC IMI 质粒编码：KPC GES 质粒编码 OXA-23 OXA-24 OXA-51 OXA-58 OXA-55 OXA-48 OXA-50 OXA-60 OXA-62 金属酶，位于GMEs上，包括VIM，IMP，GIM，SPM，SIM等 可以被酶抑制剂抑制 可以被EDTA抑制 * 碳青霉烯酶表型检测方法-改良hodge试验 ATCC25922，0.5麦氏，1:10稀释涂MH平板 平皿中心贴10μg 厄他培南或亚胺培南纸片 10μl环挑取3 ～ 5个菌落从平板中心纸片边缘向平板边缘划线 被测菌株与大肠埃希菌ATCC25922 抑菌环交汇处大肠埃希菌生长增强，即产碳青霉烯酶。 * 改良hodge试验的结果判读 * 3_jhindler China 2009 GP * Hypothesized transfer of vanA (two-step process) 3_jhindler China 2009 GP * jhindler CLSI Taiwan Nov 08 * 3_jhindler China 2009 GP * 琼脂 细菌药物敏感试验及其耐药表型检测 * 抗菌药物敏感试验 测定抗菌药物在体外对病原微生物有无抑菌或杀菌作用的方法称为抗菌药物敏感性试验（Antimicrobial Susceptibility Test），简称药敏试验（AST）。 * 药敏试验的意义 预测抗菌治疗的效果； 指导抗菌药物的临床应用； 发现或提示细菌耐药机制的存在，能帮助临床医生选择合适的药物，避免产生或加重细菌的耐药； 监测细菌耐药性，分析耐药菌的变迁，掌握耐药