动物的人工授精[宣讲].pptVIP

第六节 精液的冷冻保存 第四章 人工授精 第六节 精液的冷冻保存 目录 * 精品PPT | 借鉴参考 精液冷冻概述 第四章 人工授精 第六节 精液的冷冻保存 目录 1950年英国科学家Polge和Smith采用卵黄和甘油作保护剂，用干冰作冷源进行精液的冷冻，解冻后授精成功，开创了世界人工授精的新世代。 到90年代，发达国家的全部奶牛和绝大多数肉牛采用冻精输精。精液冷冻保存成为最可靠的保存方法。 * 精品PPT | 借鉴参考 精液冷冻的原理（一） 第四章 人工授精 第六节 精液的冷冻保存 目录 超低温使精子处于零代谢状态，升温后能使精子复苏并且不失去受精能力。 但精子冷冻过程会由于形成冰晶使精子受到损害，这些损害包括： 精子外的水分先形成冰晶，而形成精子内外的渗透压差，导致精子水分外渗，精子内渗透压增高，电解质浓度提高，酸碱失去平衡。 冰晶的形成造成： 产生机械压力，导致细胞表层破坏 冰晶渗透入精子内部，破坏精子结构 如果在冷冻过程只形成微小冰晶，即玻璃化状态，则精子就不容易受到损伤，解冻后能恢复活力。 * 精品PPT | 借鉴参考 精液冷冻的原理（二） 第四章 人工授精 第六节 精液的冷冻保存 目录 形成玻璃化状态的条件： 防冻剂干扰晶格的排列形成“过冷溶液” 快速降温，使水分子来不及移动和排列，就失去了能量，形成更“过冷溶液” 快速降温使液体只能形成极微小的“微晶” 保存和解冻过程的变化： 冰晶很微小，所以表面能很高，微晶总是力图合并成大冰晶 一旦吸收一定的能量，冰晶就会合并成大冰晶，从而使精子受到破坏。 保存过程中，即使冻精温度只升高到-60 ℃，也可能使精子死亡 冻精在解冻时也需要快速升温，才能保证防止微晶在解冻过程中形成大冰晶 * 精品PPT | 借鉴参考 注意：让稀释后的精液通过毛细作用自行吸入！ 用吸管稀释后精液注入计数室 共有两个对称的计数室 第四章 人工授精 第三节 精液品质检查 * 精品PPT | 借鉴参考 用移液器注入精液 返回 第四章 人工授精 第三节 精液品质检查 * 精品PPT | 借鉴参考 精子计数 将计数板固定在显微镜的推进器内，用100倍放大找到计数室，再用400倍找到计数室的第一个中方格。 计数左上角至右下角五个中方格的总精子数，以精子的头部为准，依数上不数下，数左右不数右的原则进行计数格线上的精子。 第四章 人工授精 第三节 精液品质检查 * 精品PPT | 借鉴参考 进行精子计数的中方格数可以是四角一中心共5个中方格 也可以是从左角到右下角五个中方格 第四章 人工授精 第三节 精液品质检查 * 精品PPT | 借鉴参考 以图示次序计数，精子的头部为准，依数上不数下，数左右不数右的原则进行计数格线上的精子。白色精子不计数 返回 第四章 人工授精 第三节 精液品质检查 * 精品PPT | 借鉴参考 计算精子密度 精子密度= 5个中方格总精子数×5×10×1000 × 稀释倍数 第四章 人工授精 第三节 精液品质检查 * 精品PPT | 借鉴参考 例：牛精子密度测定程序 放计数板 于载物台上 取样稀 释精液 精液注入 计数室 镜检 精子计数 密度计算 计数板和盖玻片一定要清洁 取500ul 3%氯化钠于小试管中,加入5ul原精液,混合均匀 取25ul小心地从计数板与盖玻片的接缝中加入,使其自行吸入计数室中 用100倍和400倍观察 计数五个中方格的总精子数,计数以头部为准,在格线上的数上不数下,数左不数右 精子密度= 5个中方格总精子数5×10×1000 × 100 结束 第四章 人工授精 第三节 精液品质检查 * 精品PPT | 借鉴参考 （四）畸形率检查 第四章 人工授精 第三节 精液品质检查 * 精品PPT | 借鉴参考 1、染色剂 0.5克龙胆紫用20ml酒精助溶，加水至100ml，过滤至试剂瓶中备用。 美兰、纯兰或红墨水 第四章 人工授精 第三节 精液品质检查 * 精品PPT | 借鉴参考 2、稀释 稀释液0.9%NaCl 牛：1:10 羊:1:20 猪: 1:2 第四章 人工授精 第三节 精液品质检查 * 精品PPT | 借鉴参考 3、抹片 左手食指和拇指向上捏住载玻片两端，使载玻片处于水平状态，取10ul稀释后的精液滴至载玻片右侧。右手拿一载玻片或盖玻片，使其与左手拿的载玻片呈向右的45度角，并使其接触面在精液滴的左侧。将载玻片向右拉至精液刚好进入两载（盖）玻片形成的角缝中，然后平稳地向左推至左边。抹片后，使其自然风干。 第四章 人工授精 第三节 精液品质检查 * 精品PPT | 借鉴参考 4、固定