调控狂犬病病毒嗜神经的宿主因子筛选.pdfVIP

摘 要 狂犬病（Rabies ）是由狂犬病病毒感染引起的人畜共患病，临床大多表现为特异性恐风、恐 水，咽肌痉挛、不可逆的脑脊髓炎等。尽管现在可以预防狂犬病，但我国狂犬病报告死亡数一直 位居法定报告传染病前列。目前狂犬病没有有效的治疗方法，一旦发病，这种疾病几乎是致命的， 对人的生命健康带来严重威胁。近年来对狂犬病的研究取得了一些进展，但对于狂犬病病毒感染 发病机理的研究还不透彻。狂犬病病毒（Rabies Virus, RV ）是一种严格的胞内寄生病毒，病毒的 整个生命周期需要多种宿主蛋白的参与。因此，探索与病毒生命周期相互作用的宿主蛋白并深入 理解其作用机制，将有助于我们解释病毒生命周期，为狂犬病的防治提供新的靶点，为研究高效 的口服疫苗奠定基础。最近几年兴起的基于CRISPR 技术高通量筛选技术几乎能够对病毒生命周 期的所有方面进行系统的研究，可快速寻找参与病毒侵入、复制等生物学过程的关键宿主蛋白。 所以，CRISPR/Cas9 技术将会为狂犬病病毒生命周期的进一步探索，靶向药物的设计及治疗提供 有力的技术支持。本研究通过使用慢病毒转导的方法在鼠神经瘤母细胞 （N2a ）细胞上构建表达 Cas9 蛋白的N2a-Cas9 单克隆细胞系，经过Western Blot 验证Cas9