生物制品教案资料.ppt

生物制品;2 疫苗的种类;2.2 新型疫苗;4）基因工程疫苗 利用基因工程构建重组基因序列，表达免疫原性强、无毒性的多肽制成的疫苗。 如：乙型肝炎基因工程疫苗 5）DNA疫苗 用编码抗原基因制成的疫苗。 如流感病毒核蛋白DNA疫苗 通常也习惯地将遗传重组疫苗、合成肽疫苗和抗独特型抗体疫苗包括在新型疫苗范畴。 ;3 疫苗的基本成分、性质和特征;可用作抗原的生物活性物质有：灭活病毒或细菌、活病毒或细菌通过实验室多次传代得到的减毒株、病毒或菌体提纯物、有效???白成分、类毒素、细菌多糖、合成多肽以及近年来发展DNA疫苗所用的核酸等。 佐剂，能增强抗原的特异性免疫应答。目前常用的有铝佐剂和油制佐剂。 ;3.2 疫苗的基本性质 包括免疫原性、安全性、稳定性。 免疫原性：指疫苗接种进入机体后引起机体产生免疫应答的强度和持续时间。 影响的因素包括机体的因素和疫苗的因素。从疫苗的角度看是由疫苗的抗原决定的。包括抗原的强弱、大小和稳定性以及抗原的理化性质。;4 疫苗制备的基本过程;疫苗制备工艺流程;4.1.1毒种的选择和减毒;4.1.2 病毒繁殖;培养细胞的生长方式及类型;悬浮生长型细胞 少数细胞类型在体外培养是不需要附着于底物而于悬浮状态下即可生长，来源于血液、淋巴组织的细胞，许多肿瘤细胞（包括杂交瘤细胞）和某些转化细胞均属于这一类型。这些细胞在悬浮培养中生长良好，可以是单个细胞或细小的细胞团，细胞呈圆形。细胞悬浮生长于培养基中，细胞生长空间大，具有能够提供增殖大量细胞、传代方便、易于收获的优点。;维持细胞培养所需的最佳条件 在大规模培养动物细胞的过程中，最根本的是使细胞的培养条件达到最优化，尽可能消除或减轻环境对细胞的影响，维持细胞高存活力和高效表达，同时又要充分考虑细胞表达产物的后续纯化。;配制细胞生长最适合的培养基 常用维持液和生长液 Eagle、RPM1640,DEME等作为维持液，加入牛血清为生长液。 细胞培养环境 影响细胞培养的主要因素有:CO2、溶氧(DO)、温度、pH值、葡萄糖、氨、乳酸、甲基乙二醛(MG)、培养基成分等。;细胞培养环境 最适CO2水平为4%～10%， 溶氧维持在20%～50%， 温度大多数在37℃， pH值在7.0～7.4之间。 控制细菌污染，加入青霉素、链霉素 培养时间2－4天。 葡萄糖是细胞培养过程中主要的能量来源，必须维持在一定水平。;4.1.3 疫苗的灭活 原则：充分破坏疫苗的毒力，尽量减少疫苗免疫力损失。 含有大量动物组织的疫苗，0.2％－0.4％的甲醛或酚溶液；细胞培养的疫苗，0.02％-0.05％甲醛 灭活的温度和时间：生物学性质和热稳定性 4.1.4 疫苗的纯化 去除存在的动物组织，降低接种不良反应。 4.1.5 冻干 升华，不使疫苗融解。疫苗稳定性提高1倍以上。;乙型肝炎疫苗的制备;乙肝病毒发病区域;乙型肝炎病毒;乙肝病毒传染途径;乙肝病毒检测;HBV感染血清标志及其临床意义 ;乙肝疫苗的制备－血源疫苗;乙肝疫苗的制备－人工合成多肽疫苗;乙肝疫苗的制备－基因工程疫苗; 目前大规模生产的表达系统有酿酒酵母、毕赤酵母和汉逊酵母等基因工程疫苗，其次为CHO细胞基因工程疫苗，还有HBsAg+PreS2或HBsAg+PreS1+ PreS2（CHO细胞和酵母表达系统）。;4.2 细菌类疫苗和类毒素的一般制造方法;疫苗和类毒素制备工艺流程;4.2.1 菌种的选择;4.2.2培养基的营养要求 碳、氮源和无机盐等必需外，有时需添加生长因子。 结核杆菌以甘油为碳源，百日咳杆菌需要谷氨酸，胱氨酸为氮源。 4.2.3 培养条件控制 氧分压、温度、pH、避光、渗透压 4.2.4 杀菌 彻底杀死细菌不影响防病效力 4.2.5 稀释、分装和冻干 含防腐剂的NS稀释，无菌分装。;卡介苗疫苗生产工艺;白喉疫苗的生产工艺;⑶脱毒 毒素经甲醛加温处理后，去除毒性而保留其抗原性，形成类毒素 ①温度、pH、甲醛浓度及毒素自身的影响 ②脱毒后精制和精制后脱毒 a.原制毒素脱毒 质量稳定，毒素逆转现象少；但含有大量培养基残留物质，进一步提纯有困难，脱毒体积大，不利于操作。;b.精制毒素脱毒 脱毒体积小，工艺紧凑利于操作，且可获得高纯度制品。但易发生毒性逆转现象。 ⑷白喉类毒素的精制 去除细菌代谢的产物及培养基中残留的有机物、无机盐等非特异性杂质，提高白喉类毒素的纯度，降低接种副反应。 活性炭、硫酸铵分段沉淀法;5核酸疫苗;发展历史;核酸疫苗的制备;⑸质粒DNA的纯化 去除细胞碎片、蛋白质、脂类物质和RNA ⑹质粒的浓缩：乙醇沉淀 ⑺