生物技术综合实验课：实验八 重组DNA的转化.pptVIP

四.操作步骤 ? 1、DNA片段的连接 实验顺序： 接种DH5?，培养 DNA连接反应 感受态细胞制备 LB平板的处理 转化 次日观察结果，计算重组率和转化率 * * 实验八 重组DNA的转化 一.实验目的 掌握用CaCl2法制备感受态细胞的原理和方法。 学习和掌握质粒DNA的转化方法及操作步骤。 二. 原理 质粒必须通过转化，才能进入细菌内进行扩增。转化效率的高低与受体菌的生理状态有关。用CaCl2处理细菌可以提高细菌吸收周围环境中的DNA分子,这种状态的细菌被称为感受态细菌。 冰冷条件下，CaCl2能使细菌细胞膨胀，细胞壁通透性增强，转移到42℃下进行短暂热刺激，待转化的外源DNA便会被细胞所吸收。 决定细菌转化效率（频率）的因素有：DNA的浓度、纯度和构型；转化细胞的生长状态；在CaCl2处理和储藏之后的存活率以及转化的环境条件如：温度、pH值、离子浓度等。 重组质粒的筛选（?-互补法）： PUC质粒系列都带有一个大肠杆菌的短区段，其中含有?-半乳糖苷酶基因（lacZ）的调控序列和N端146个氨基酸的编码信息，该编码区中插入了一个多克隆位点，它不破坏读码框，但可以使少数几个氨基酸插入其N端，而不影响功能。这种载体使用于编码?-半乳糖苷酶C端部分序列的宿主细胞（如DH5?）。这样，