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篇一：培养基的制备与灭菌实验报告 陕西师范大学远程教育学院 生物学实验报告 报告题目培养基的制备与灭菌 姓名刘伟 学号 专业生物科学 批次 /层次 指导教师 学习中心培养基的制备与灭菌 一、目的要求 掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。 掌握培养基的配置原则和方法。 掌握高压蒸汽灭菌的操作方法和注意事项。 二、基本原理 牛肉膏蛋白胨培养基： 是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。由于这种培养基中 含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供细菌生长繁殖之用。 高压蒸汽灭菌： 主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。将灭菌的物品放在一个密闭和加 压的灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。待蒸汽将锅内冷空气从排气阀中 趋尽，关闭排气阀继续加热。此时蒸汽不溢出，压力增大，沸点升高，获得高于 100 C 的温度导致菌体蛋白凝固变性，而达到灭菌的目的。 三、实验材料 药品：牛肉膏、蛋白胨、 nacl 、琼脂、 1mol/l 的 naoh 和 hcl 溶液。 2. 仪器及玻璃器皿：天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三 角瓶、培养皿、玻璃漏 斗等。 3. 其他物品：药匙、称量纸、  ph  试纸、记号笔、棉花等。 四、操作步骤 （一）玻璃器皿的洗涤和包装 1 ．玻璃器皿的洗涤 玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。 将三角瓶、 试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中． 用 毛刷刷洗，然后用自来水及蒸馏水冲净。移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再用自来水及蒸 馏水冲洗。 洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。 2．灭菌前玻璃器皿的包装 （ 1 ） 培养皿的包扎：培养皿由一盖一底组成一套，可用报纸将几套培养皿包 成一包，或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内，加盖灭菌。包装后的培养皿须经灭 菌之后才能使用。（ 2） 移液管的包扎：在移液管的上端塞入一小段棉花 （勿用脱脂棉 ），它的作 用是避免外界及口中杂菌进入管内，并防止菌液等吸入口中。塞入此小段棉花应距管口约 0.5cm  左右，棉花自身长度约  1~1.5cm  。塞棉花时  .  可用一外围拉直的曲别针、  将少许棉花塞 入管口内。棉花要塞得松紧适宜，吹时以能通气而又不使棉花滑下为准。 先将报纸裁成宽约  5cm  左右的长纸条，然后将已塞好棉花的移液管尖端放在长条报纸的一端，  约成 45 C  角，折叠纸条包住尖端，用左手握住移液管身，有手将移液管压紧  .  在桌面上向前  搓转，以螺旋式 包扎起来。上端剩余纸条，折叠打结，准备灭菌。 （二）液体及固体培养基的配制过程 1．液体培养基配制 （ 1）称量（假定配制 1000ml 培养基） 按培养基配方比例依次准确地称取 3.0g 牛肉膏、 10.0 g 蛋白胨 5.0gnacl 放入烧杯（或 1000ml 刻度搪瓷杯）中．牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧 杯。 （ 2 ）溶化 在上述烧杯中先加入少于所需要的水量（如约 70 0 m l ），用玻棒搅匀，然后，在石棉网 上加热 使其溶解，将药品完全溶解后，补充水到所需的总体积（ 1000ml ）；如果配制固体培养基时， 将称好的琼脂放人已溶的药品中，再加热溶化，最后补足所损失的水分。 （ 3）调 ph 调 ph ： —般用 ph 试纸测定培养基的 ph 。用剪刀剪出一小段 ph 试纸，然后用镊子夹取此段 ph 试纸， 在培养基中蘸一下，观看其 ph 范围，如培养基偏酸或偏碱时，可用 1mol/l naoh 或 1mol/l hcl 溶液进 行调节。调节 ph 时，应逐滴加入 naoh 或 hci 溶液，防止局部过酸或过 碱，破坏培养基中成分。边加 边搅拌，并不时用 ph 试纸测试，直至 ph 达 7.4-7.6 。反之， 用 1mol ／lhcl 进行调节。 2．固体培养基的配制 配制固体培养基时，应将已配好的液体培养基加热煮沸，再将称好的琼脂 （1.5~2 ％）加 入，并用玻棒不断搅拌，以免糊底烧焦。继续加热至琼脂全部融化，最后补足因蒸发而失去 水分。 （三） 培养基的分装 根据不同需要，可将已配好培养基分装入试管或三角瓶内，分装时注意不要使培 养基沾污管 口或瓶口， 造成污染。 如操作不小心， 培养基沾污管口或瓶口时， 可用镊子夹一小块脱 脂棉， 擦去管口或瓶口的培养基，并将脱脂棉弃去。 1 ．试管的分装 取一个玻璃漏斗，装在铁架上，漏斗下连一根橡皮管，橡皮管下端再与另一玻璃管相 接，橡 皮管的中部加一弹簧夹。分装时，用左手拿住空试管中部，并将漏斗下的玻璃管嘴插入试管 内，以右手拇指及食指开放弹簧夹， 中指及无名指夹