细胞工程重点.docVIP

细胞工程（Cell engineering）是指主要以细胞为对象，应用生命科学理论，借助工程学原理与技术，有目的地利用或改造生物遗传性状，以获得特定的细胞、组织产品或新型物种的一门综合性科学技术。 ◆研究对象：动植物细胞（原生质体），也包括细胞器、染色体、细胞核、胚胎。 细胞凋亡（apoptosis）：指机体为维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序性死亡。 ◆细胞坏死（necrosis）：是细胞受到物理因素（如热、辐射）、化学因素（如强酸、强碱、有毒物质）或生物因素（如病原体）作用，引起细胞无序变化的死亡过程。  贴壁型生长细胞:附着在某一固相支持物表面才能 生长的细胞。 悬浮型生长细胞:不必附着于固相支持物表面，在悬浮状态下即可生长的细胞。 二）悬浮生长型 培养时不贴附于底物而呈悬浮状态生长或以机械方法使之保持悬浮状态生长的细胞叫悬浮生长型细胞。 特点： 不贴附在支持物上 生长，胞体圆形。 优点：在培养液中生长空间大，提供数量大； 传代方便(只需稀释而不需消化处理)； 可长时间生长，繁殖旺盛便于做细胞代谢研究。 缺点：观察不方便 很多细胞不能悬浮生长 悬浮生长型细胞与贴附生长型细胞相比， 具有哪些优点和缺点？ 优点：在培养液中生长空间大，提供数量大； 传代方便(不需消化)； 可长时间生长，繁殖旺盛便于做细胞代谢研究。 缺点：观察不方便 很多细胞不能悬浮生长 细胞在体外生长时具有贴附、接触抑制和密度依赖性三大特点。 接触抑制可作为区别正常细胞与肿瘤细胞的标志之一。 正常细胞生长密度过大时，细胞变得拥挤，生存空间消失，同时培养基中的营养物被逐渐消耗掉，代谢产物增多，细胞停止分裂增殖，这种特性称为密度抑制 思考题4：体外培养的细胞具有哪些生长特点？ 体外培养细胞重要的生长特点有：贴附并伸展以及接触抑制和生长的密度依赖性。 贴附并伸展，是多数体外培养细胞的基本生长特 点。大多数细胞在体外均附着于一定的底物而生长。培养细胞在未贴附于底物之前均似圆球样，当与底物贴附后，细胞逐渐伸展而形成一定的形态 接触抑制是由于细胞相互接触而抑制细胞运动性的现象。正常细胞不会发生相互重叠，而是呈单层细胞生长。 密度抑制是当细胞密度达到一定程度后，营养相对缺乏，代谢产物增多，细胞受营养的枯竭和代谢物的影响而发生的现象，此时细胞停止分裂。 干细胞是一类具有自我更新和分化潜能的细胞。 思考题5：体外培养细胞的生命期包括哪几个时期？ 每一时期的细胞具有哪些特点？ 包括原代培养期、传代培养期及衰退期。 原代培养期：细胞移动活跃；可见细胞分裂，但不旺盛；呈二倍体核型；与体内原组织的形态结构和功能基本相似。 传代培养期：细胞增殖旺盛，并维持二倍体核型。 衰退期：细胞增殖减慢，轮廓逐渐增强，走向 衰退凋亡。 生物学意义： 原代培养是直接从生物体获取细胞进行培养，故更接近于生物体内的生活状态。为研究生物体细胞的生长、代谢、繁殖提供有力的手段； 作为传代培养的基本条件； 可直接服务于临床实践，进行药物测试。例如，用从手术中切除的肿瘤细胞进行原代培养，然后进行抗癌药物的筛选，根据肿瘤细胞对化疗药物的敏感性来选择最有效的化疗方案 二、体外培养细胞有哪些类型？其生长特点有什么区别？ 成纤维型细胞 贴壁型细胞 上皮型细胞 游走型细胞 多形型细胞 悬浮型细胞 生长特点从形态、生长形式等加以区别比较 潜伏期、指数生长期和停滞期。 细胞有代谢及运动，但无增殖。细胞分裂相增多时，标志细胞进入指数生长期 细胞增殖最旺盛阶段，分裂相增多，活力最佳 细胞不增殖，有代谢活动。 血清存在的问题 1. 存在有害于细胞生长和繁殖的物质。如补体、免疫球蛋白和一些生长抑制因子。 2. 成分不明确，影响对结果的分析。 3. 不同动物、不同批次的血清和活性差别较大，使培养的结果不稳定。 问题1:体外培养的细胞需要哪些物质？ 水、糖、氨基酸、维生素、无机离子和微量元素、血清和促生长因子。 问题2：体外培养的哺乳动物细胞需要在什么环境下 生长？如何获得这些环境？ 温度：36.5±0.5℃ pH：7.1~7.3 渗透压：260~320mOsm/kg 气体：95% O2和5%CO2 微生物污染细胞后的现象对比： 细菌：增殖快，短时间在数量上压过细胞产生毒素杀死细胞。 真菌：种类繁多，形态各异，呈白色或浅黄色小点，飘浮于培养液面，肉眼可见。 支原体、病毒：无致死毒性，对细胞形态和机能的影响是长期的、缓慢的和潜在的，短时