细胞工程：第三章 细胞工程基本技术.pptVIP

课堂测验（一）小结 一、细胞工程的主要研究内容和研究技术有哪些？ 1. 动植物人工繁殖技术 2. 新品种培育技术 3. 生物制品生产技术 4. 细胞疗法与组织工程 二、体外培养细胞有哪些类型？其生长特点有什么区别？ 成纤维型细胞 贴壁型细胞 上皮型细胞 游走型细胞 多形型细胞 悬浮型细胞 生长特点从形态、生长形式等加以区别比较。 三、每代细胞的生长曲线包括哪几个主要时期？各期细胞有何特点？ 细胞的“一代”是指从细胞接种到分离再培养的一段时间。要与“细胞生命期”区分开。 包括潜伏期、指数生长期和停滞期。 第一节细胞培养的营养条件及影响因素  一、细胞培养所需的基本物质 与体内基本相同，除糖类、氨基酸、脂类三大类营养物质外，也需要一定量的无机盐、维生素和微量元素等。但需要的量以及代谢方式与体内细胞不尽相同。 1、水 细胞培养用水必须经过2~3次玻璃器皿蒸馏或用离子交换树脂处理。保证水的纯度高，如水中含有杂质，会对细胞有不利影响，有些有毒物质和元素，即使含量极微，也可能引起细胞中毒以至死亡。 2、糖 细胞靠糖的氧化获得能量。六碳糖是主要的能源，通过糖酵解形成乳酸和通过柠檬酸形成CO2。 体外培养动物细胞时，几乎所有培养基或培养液中都以葡萄糖作为必含的能源物质。 3、氨基酸 12种基本氨基酸：精氨酸(Arg)、胱氨酸(Cys)、异亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)、赖氨酸(Lys)、蛋氨酸(Met)、苯丙氨酸(Phe)、苏氨酸(Thr)、色氨酸(Trp)、组氨酸(His)、酪氨酸(Tyr)、缬氨酸(Val)是细胞蛋白质合成的原料。 另外，还需要谷氨酰胺。 所有细胞都需要谷胺酰胺，其特殊的作用： ◆可促进各种氨基酸进入细胞膜； ◆所含的 氨 是核酸中嘌呤和嘧啶的来源； ◆是合成ATP、ADP、AMP时所需物质; ◆是能源和碳源的来源。 如没有谷胺酰胺，细胞生长不良，发生细胞死亡。所以要求各种培养液中都含有较大量的谷胺酰胺。 谷氨酰胺在溶液中不稳定，应放置在－20℃冰箱保存，用前加入培养液内。已含有谷氨酰胺的培养液在4℃冰箱内放置，两周以上时重新加入原来量的谷氨酰胺。 4、维生素 维生素的需求量随细胞而异，如生物素、叶酸、烟酰胺、核黄素、硫胺素、泛酸、吡多醇及B12等，这些维生素在常用培养基中已成为固定组成成分。 脂溶性维生素对细胞生长也有作用，一般从血清中得到补充。 5、无机离子和微量元素 在细胞生长过程中，钾、钠、钙、镁、氮和磷是细胞生长所必需的，参与细胞的代谢。 以外，还需要微量元素，如铁、锌、硒、铜、锰、钼、钒等也是细胞生长所需要的。 6、血清 血清的生物学功能： （1）补充培养液中没有或量不足的营养物质：氨基酸、维生素、无机物、脂类物质、核酸衍生物等，是细胞生长必需的物质； （2）提供激素和各种生长因子：胰岛素、肾上腺皮质激素（氢化可的松、地塞米松）、类固醇、激素（雌二醇、睾酮、孕酮）等。生长因子如成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、血小板生长因子等； 由叫生长因子的可溶性蛋白质传递信息。细胞释放一个生长因子，然后在胞际间隙移动，影响另一个细胞。这个靶细胞的回应是启动生长和分裂。 （3）提供结合蛋白：结合蛋白作用是携带重要的低分子量物质，如白蛋白携带维生素、脂肪、以及激素等，转铁蛋白携带铁。结合蛋白在细胞代谢过程中起重要作用。 （4）含有生长基质成分使细胞易贴附在培养器皿上，例如纤粘连蛋白(fibronectin，FN)。 （5）对培养中的细胞起到某些保护作用： ◆提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤。 ◆有一些细胞，如内皮细胞、骨髓样细胞可以释放蛋白酶，血清中含有抗蛋白酶成分（蛋白酶抑制剂），起到中和作用。 胰蛋白酶被广泛用于贴壁细胞的消化传代，可以使用血清来终止胰蛋白酶的消化作用。 ◆血清蛋白形成了血清的粘度，可以保护细胞免受机械损伤，特别是在悬浮培养搅拌时，粘度起到重要作用。 ◆血清还含有一些微量元素和离子等中和毒性物质，保护细胞不受伤害，他们在代谢解毒中起重要作用，如SeO3、硒等。 细胞培养液中添加的血清有牛血清、马血清、人血清等，其中牛血清是最常用的血清，分为胎牛血清和新生小牛血清。 胎牛血清是从母牛破腹取出的胎牛中分离出的血清，价格昂贵。新生小牛血清是从刚出生的尚未哺乳的小牛中分离出来的血清，如小牛