《食品卫生检测技术》全套教学课件.ppt

食品卫生细菌的检测技术 （四）大肠菌群检验程序： 见图7-3。 图7-3 大肠菌群乳糖发酵法检验程序 食品卫生细菌的检测技术 （五）操作步骤 1．检样稀释 （1）以无菌操作将检样25mL（或g）放于含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1:10的均匀稀释液。固体检样最好用均质器，以8 000～10000r/min的速度处理1min，做成1:10的均匀稀释液。 （2）用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL，注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混匀，做成1:100的稀释液。 （3）另取1mL灭菌吸管，按上条操作依次做10倍递增稀释液，每递增稀释一次，换用1支1mL灭菌吸管。 （4）根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择三个稀释度，每个稀释度接种3管。 食品卫生细菌的检测技术 2．乳糖发酵试验 将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，接种量在1mL以上者，用双料乳糖胆盐发酵管，1mL及1mL以下者，用单料乳糖胆盐发酵管。每一稀释度接种3管，置36±1℃温箱内，培养24±2h，观察是否产气。如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为大肠菌群阴性，如有产气者，则按下列程序进行。 3．分离培养 将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板（EMB）上，置36℃±1℃温箱内，培养18～24h，然后取出，观察菌落形态，并做革兰氏染色和证实试验。 食品卫生细菌的检测技术 4．证实试验 在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落1～2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置36℃±1℃温箱内培养24 h±2h，观察产气情况。凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌，即可报告为大肠菌群阳性。 5．结果报告 （1）记录 详细记录试验现象。 （2）报告 根据证实为大肠菌群阳性的管数，查表7-2“大肠菌群最可能数（MPN）检索表”，报告每100mL（g）大肠菌群的MPN值。　　 食品卫生细菌的检测技术 食品卫生细菌的检测技术 食品卫生细菌的检测技术 （六）粪大肠菌群（faecal coliferm）的检验 粪大肠菌群： 指一群能在44℃，24h内发酵乳糖产酸产气和利用色氨酸产生靛基质，需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，属大肠埃希氏菌Ⅰ型。 粪大肠菌群的唯一来源是粪便，所以它是粪便污染的确切指标。在被检样品中，如果有粪大肠菌群存在，在大肠菌群检验中也被计入，大肠菌群数实际上就是总大肠菌群数。 一般，大肠菌群和粪大肠菌群数均高，多考虑为近期污染；如果大肠菌群数高，而粪大肠菌群数低，则应着重考虑粪便的远期污染。 食品卫生细菌的检测技术 第一节 菌落总数的测定 第二节 大肠菌群的测定 食品卫生细菌的检测技术 第一节 菌落总数的测定 一、菌落总数的标准平板培养计数法 （一）原理 平板菌落计数法是通过将样品制成一系列不同的稀释液，使样品中的微生物个体分散成单个细胞状态。再取一定量的稀释度接种，使其均匀分布于培养皿中的培养基上。培养后统计菌落数目，一般认为每个菌落是由一个细菌增殖后形成的，这样就可计算出样品中的含菌数。 （二）仪器用具 冰箱（0～4℃）、恒温培养箱（36℃±1℃）、恒温水浴锅（46℃±1℃）、托盘天平、可调式电炉、高压灭菌锅、吸管、广口瓶或三角瓶（500mL）、玻璃珠（直径为5mm）、平皿（皿底直径为9cm）、试管（18mm×200mm）、试管架、放大镜、菌落计数器、酒精灯、均质器或乳钵、灭菌剪刀、灭菌镊子、75％酒精棉球、玻璃蜡笔、登记簿、不锈钢勺等。 食品卫生细菌的检测技术 （三）培养基和试剂 1．营养琼脂培养基 成分: 蛋白胨10g、牛肉膏3g、氯化钠5g、琼脂15g、蒸馏水1000mL。 制法： 将蛋白胨、牛肉膏、氯化钠溶解于蒸馏水中，加入15%氢氧化钠溶液2mL，校正pH值至7.2～7.4。加入琼脂，加热煮沸，使琼脂溶化。分装烧瓶，121℃高压灭菌15min。 2．磷酸盐缓冲稀释液 （1）储存液 成分： 磷酸二氢钾34g、1mo1/L氢氧化钠175mL、蒸馏水540mL。 制法： 磷酸二氢钾溶解后，用1mo1/L氢氧化钠，调pH值至7.2，再加蒸馏水至1000mL，经121℃，15min高压灭菌后储于冰箱内作为原液备用。 食品卫生细菌的检测技术 （2）稀释液 取储存液1.25mL，加蒸馏水至1000mL，分装每瓶100 mL或每管10 mL，经121℃，15min高压灭菌后备用