最新全血RNA提取步骤.docxVIP

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2020-11-26 发布于天津
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最新全血RNA提取步骤.docx

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Trizol法提取全血总RNA 实验前准备: Trizol，氯仿，异丙醇，75%乙醇（用RNase-Free水配制），RNase-Free水，柠檬酸钠抗凝管。 1 ml注射器，1.5、3ml EP管（DEPC处理过），大、中、小号枪头（DEPC处理） 150—250ul 全血加入10倍体积TRIzol （主要是异硫氧酸脈）（1.5ml?2.5ml），充分吹打混匀，室温静置5min （使核酸蛋白复合物完全分离）。核酸蛋白复合物完全分离）。每1毫升的TRIzol试剂加入200ul的氯仿（300』?500ul ），静置3min，离心12000g，4C, 将上层水相转移到1.5ml EP管中，加500ul的异丙醇，上下颠倒混匀 10s，室温静置10min ，离心 12000g，4C, 10min，弃上清。加入1 ml的75%乙醇‘上下颠倒混匀10s，离心7500g ‘ 4C, 10min ‘弃上清。室温卜下燥5-1 Omin （充分干燥不好溶解）‘加入50ul的RNase-free-water充分溶解RNA。分光光度计测OD值。实验流程團细胞pH5.7 实验流程團细胞 pH5.7 （取2卩I进行电泳，其余?80C保存？） #加入TRIzol后可选步骤：如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或胞外物质（肌肉，植物结节部分等）可于 2-8 C 10000 X g离心10分钟，取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织时，上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。 ▲分光光度计检测质量取出2 ul定量? 测量 buffer: 10mM TrisCI(pH7.8)。 A260/A280=1.8-2.1，说明 RNA 质量可靠； A260/A2801.8，说明有蛋白污染； A260/A2802.1，说明RNA存在降解。 ▲电泳检测 RNA电泳检测RNA完整性：配制1 %的凝胶，上样，120V电泳20min，紫外灯下观察结果，若能看到28S和18S两条带，且亮度约为2 ： 1,说明RNA完整性较好。【下载本文档,可以自由复制内容或自由编辑修改内容，更多精彩文章，期待你的好评和尖注，我将一如既往为您服务】医药交流