生物工程下游技术实验（整理版）.pdfVIP

生物工程下游技术实验 实验一 酵母 RNA 的提取及含量测定（紫外吸收法） 实验二 黑曲霉β-D 甘露聚糖酶的纯化盐析 实验三 盐析β-D 甘露聚糖酶活力测定 实验四 柠檬酸摇瓶发酵及结晶提取 6 实验一 酵母 RNA 的提取及含量测定 一、实验目的与要求 1、了解并掌握稀碱法提取 RNA 的原理和方法。 2、熟悉和掌握紫外吸收法测定核酸含量原理和操作方法， 3、熟悉紫外分光光度计的基本原理和使用方法。 二、实验原理 由于 RNA 的来源和种类很多，因而提取制备方法也很各异。一般有苯酚法、 去污剂法和盐酸胍法。其中苯酚法又是实验是最常用的。组织匀浆用苯酚处理并 离心后，RNA 即溶于上层被酚饱和的水相中，DNA 和蛋白质则留在酚层中。向水 层加入乙醇后，RNA 即以白色絮状沉淀析出，此法能较好的除去 DNA 和蛋白质。 上述方法提取的 RNA 具有生物活性。工业上常用稀碱法和浓盐法提取 RNA，用这 两种方法所提取的核酸均为变性的 RNA，主要用作制备核苷酸的原料，其工艺比 较简单。浓盐法使用 10%左右氯化钠溶液，90℃提取 3-4h，迅速冷却，提取液经 离心后, 上清液