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动物细胞工程常用的技术手段： ? 动物细胞培养、 动物细胞核移植、 ? 动物细胞融合、 单克隆抗体 ? 动物细胞培养技术 是其他动物细胞工程技术的基 础。 提问： ? 植物细胞工程常用的技术手段有哪些？ 植物组织培养 , 植物体细胞杂交 动物细胞培养和核移植技术 ? 动物细胞培养就是从动物机体内取出相关的组织， 将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基 中，让这些细胞生长和增殖。 1 、选材： 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官， 它们细胞增殖能力强，分裂旺盛，分 化程度低，容易培养。 ? 在进行动物细胞培养时，用 胰蛋白酶 分散 细胞，说明细胞间的物质主要是 蛋白质 。动 物细胞培养适宜的 PH 为 7.2 — 7.4 ，此环境下 胃蛋白酶（ 2.0 ）没有活性，而胰蛋白酶 (7.2-8.4) 的活性较高。 2. 分散成单个细胞 3. 动物细胞生长特性 ： ? 细胞贴壁： ? 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上， ? 称为细胞贴壁。 ? 要求： ? 培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于 贴附。 ? 细胞的接触抑制 ： ? 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细 胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触 抑制。 ? 4. 动物细胞培养过程 ? 胚胎成幼龄动物的组织器官（细胞来源） 单个细胞 原代细胞 细胞株 细胞系 剪碎胰蛋白酶 分离细胞 洗涤、稀释、分离 原代培养 传代培养 （遗传物质没有发生改变） （遗传物质发生改变） 细胞 悬浮 液 10 代 细胞 50 代 细胞 无限传 代 原代培养 传代培养 细胞株 细胞系 5. 如何界定原代培养和传代培养；细胞株和 细胞系？ 多数组织细胞固定在表面 生长和分裂。 随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖 遗传物质改变 动物 胚胎 或 幼龄 动 物的组织、器官 胰蛋白酶 剪碎 单个细胞 加培养液 制成 细胞 悬浮 液 细胞株 细胞系 细胞增值 无限传代 去掉组织 间蛋白 动物细胞培养不能 最终培养成生物体 思考： 2 、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组 织做动物细胞培养材料？ 1 、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组 培培养基有何独特之处？ 3 、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？ 4 、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最 终培养成新个体？ 主要成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血 清等。独特之处有： 1 、液体培养基 2 、成分中有动物血 清等 因为这些组织或器官上的细胞生命力旺盛，分裂能力强 成块组织不利培养，分散了做成细胞悬浮液利于培养 不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不 能发育成新的动物个体 5 、为什么选用胰蛋白酶做上述处理？ 弹性纤维易被胰蛋白酶分解，从而使细胞分离开来。 动物细胞培养条件： ? 1 、无菌、无毒的环境 ? （添加一定量的抗生素，定期更换培养液） ? 2 、营养 ? （ 葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。 ） ? 3 、温度和 PH ? 36.5+ （ - ） 0.5 度 , 7.2-7.4 ? 4 、气体环境： ? O 2 和 CO 2 （ 95% 空气和 5% CO 2 ） 保证细胞顺利的 生长增殖 动物细胞培养液的主要成分： 葡萄糖 、氨基酸、无机盐、维生素和 动物 血清 等。 与植物培养基相比其特点是： （ 1 ）液体培养基 （ 2 ）含有动物血清 动物体细胞大都生 活在 液体 的环境 细胞的全能性 细胞株、细胞系 植物体 培养结果 获得细胞或 细胞产物 快速繁殖、培育 无病毒植株等 培养目的 葡萄糖、动 物血清 蔗糖、植物 激素 培养基特有成分 液体培养基 固体培养基 培养基性质 细胞增殖 原理 动物细胞培养 植物组织培养 比较项目 植物细胞和动物细胞培养的比较 动物细胞培养应用 ? 大规模培养生产生物制品（病毒疫苗、干 扰素、单克隆抗体） ? 作为基因工程中的受体细胞 ? 培养的动物细胞可以用于检测有毒物质， 判断某种物质的毒性 ? 为治疗和预防癌症及其他疾病提供理论依 据 二、动物体细胞核移植技术 : ? 将动物