2020单抗与基因工程抗体.pptVIP

单克隆抗体与基因工程抗体 中山医科大学免疫学教研室 张春艳 多克隆抗体 (Polyclonal antibody) 一 . 概念 给动物接种抗原所获得的免疫 血清或抗血清是多种抗体的混合物 , 它是由多种抗原决定簇刺激多株 B 细 胞增殖分化所产生的 , 称为多克隆抗 体 . 二 . 多克隆抗体的应用 ? 免疫学检测 ? 被动免疫治疗和紧急预防 三 . 存在问题 ? 特异性差 , 用于免疫学检测容易 出现交叉反应 单克隆抗体 (Monoclonal antibody,McAb) 一 . 概念 : 通过 B 细胞杂交瘤技术 , 获得特异性 针对某一种抗原决定簇的细胞克隆， 产生均一性的抗体 . 二 .B 细胞杂交瘤的类型 小鼠 - 小鼠 大鼠 - 大鼠 小鼠 - 人 人 - 人 三 .. 杂交瘤技术的原理 1. 亲本细胞的选择 小鼠骨髓瘤细胞 次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核苷转移酶 (HGPRT) 缺陷型 免疫脾细胞 经抗原免疫的 BALB/c 小鼠的脾脏 2. 细胞融合 骨髓瘤细胞 PEG 杂交瘤细胞 脾细胞 融合后细胞的类型 : 未融合的脾细胞 杂交瘤细胞 未融合的瘤细胞 3 杂交瘤细胞的选择性培养 DNA 合成的途径 ： 糖 + 氨基酸 氨基喋呤 (Aminopterin,A) TK 核苷酸 DNA 胸腺嘧啶核苷 TMP (Thymidine,T) 核苷酸前体 次黄嘌呤 HGPRT IMP (Hypoxanthine, H) 融合后细胞在 HAT 培养基中存活情况 脾细胞（ HGPRT + , TK + , 不能长期生长） 骨髓瘤细胞（ HGPRT - , TK - ，不能生长 ） 杂交瘤细胞（ HGPRT + , TK + ，能够生长） 4. 杂交瘤细胞的筛选和克隆化 筛选： 免疫荧光 ELISA 等 克隆化： 有限稀释法 单个细胞显微操作法 软琼脂培养法 5. 单克隆抗体的生产 体内： BALB/c 小鼠体内诱发含有单抗的 腹水 体外：无血清培养基悬浮培养等 6. 单克隆抗体的纯化 硫酸铵沉淀法 离子交换层析 A 蛋白 -Sepharose 亲和层析 四 . 单克隆抗体的特性 高度均一性： 纯度很高的均一性抗体 高度专一性： 只对抗原分子上某一抗原决定 簇起反应 大量产生及稳定性： 杂交瘤细胞能在体内外无限繁殖 之传代 五 . 单克隆抗体在医学上的应用 （一）用作诊断试剂 1. 检测淋巴细胞表面分子，区分不同分化 阶段的