基因工程的基本操作程序高中生物选修3专题1第2节2017人教版.ppt

? ④有时需要确定目的基因表达的产物存在于细胞的 什么部位，往往要加上可以标记存在部位的基因 ( 或 做成目的基因与标记基因的融合基因 ) ，如绿色荧光 蛋白基因等。 ? 下表中列出了几种限制酶识别序列及其 切割位点，图 1 、图 2 中箭头表示相关限制酶的酶切 点。请回答下列问题： ? (1) 一个图 1 所示的质粒分子经 Sma Ⅰ切割前后，分别 含有 ________ 个游离的磷酸基团。 ? (2) 若对图中质粒进行改造，插入的 Sma Ⅰ酶切位点 越多，质粒的热稳定性越 ________ 。 ? (3) 用图中的质粒和外源 DNA 构建重组质粒，不能使 用 Sma Ⅰ切割，原因是 ________ 。 ? (4) 与只使用 Eco RⅠ相比较，使用 Bam HⅠ和 Hind Ⅲ两 种限制酶同时处理质粒、外源 DNA 的优点在于可以防 止 ________ 。 ? (5) 为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因 ? [ 解析 ] (1) 切割前质粒为环状，不含游离的磷酸基 团。切割后质粒成了一个链状的双链 DNA 分子，含两 个游离的磷酸基团。 (2) 因为 S ma Ⅰ 识别序列中均为 G — C 碱基对， G 、 C 之间含三个氢键，热稳定性高。 (3) 据题图可知， S ma Ⅰ 既会破坏标记基因，也会破坏目 的基因。 (4) 若用同种限制性内切酶切割质粒和外源 DNA 中的目的基因，因为两端的黏性末端能够互补配 对，会出现自身环化的情况。而用两种限制性内切 酶切割，因为两端形成的黏性末端不能够互补配对， 不会出现自身环化。 (5)DNA 连接酶可以连接具有能 够互补配对黏性末端的 DNA 片段。 (6) 标记基因可以 鉴别受体细胞是否含有目的基因。 ? [ 答案 ] (1)0 、 2 ? (2) 高 ? (3)S ma Ⅰ会破坏质粒的抗生素抗性基因、外源 DNA 中 的目的基因 ? (4) 质粒和含目的基因的外源 DNA 片段自身环化 ? (5)DNA 连接 ? (6) 鉴别和筛选含有目的基因的细胞 ? (2015 · 聊城检测 ) 下列关于基因表达载体的构建描 述错误的是 ( ) ? A ．基因表达载体的构建是基因工程的核心 ? B ．基因表达载体的构建包括目的基因、启动子、终 止子、标记基因等部分 ? C ．目的基因主要是指编码蛋白质的结构基因 ? D ．构建的基因表达载体都是相同的 ? [ 答案 ] D ? [ 解析 ] 基因表达载体的构建是基因工程的第二步， 也是基因工程的核心；一个基因表达载体的组成除 目的基因外还必须具有启动子、终止子、标记基因 等部分；目的基因主要是指编码蛋白质的结构基因； 由于受体细胞不同，基因表达载体的构建也会有差 别，不可能都是相同的。 ? 三、将目的基因导入受体细胞 ? 将目的基因导入受体细胞是实施基因工程的第三步。 目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持 稳定和表达的过程称为转化。 ? 将目的基因导入受体细胞的方法很多，应具体情况 具体分析。不同受体细胞导入方法不同。 生物种 类 常用方 法 受体细 胞 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 农杆菌转化法 体细胞 显微注射法 受精卵 Ca 2 ＋ 处理法 原核细胞 目的基因插入 Ti 质粒的 T － DNA 转化过 上→农杆菌→导 程 入植物细胞→融 合到受体细胞的 DNA →表达 目的基因表达载 体提纯→取卵 ( 受精卵 ) →显微 注射→受精卵发 育→获得具有新 性状的动物 Ca 2 ＋ 处理细胞 →感受态细胞→ 表达载体与感受 态细胞混合→感 受态细胞吸收 DNA 分子 ? 知识贴士： ①农杆菌是一种在土壤中生活的微生物， 能在自然条件下感染双子叶植物和裸子植物，而对 大多数单子叶植物没有感染力。此外，将目的基因 导入植物细胞还可采用基因枪法和花粉管通道法。 ? ②以上介绍的几种方法，在导入受体细胞之前，都 必须进行目的基因表达载体的构建，也就是说导入 受体细胞的必须是重组 DNA 分子，而不能直接导入目 的基因。 ? 采用基因工程的方法培育抗虫棉，下列 导入目的基因的做法正确的是 ( ) ? ①将毒素蛋白注射到棉受精卵中 ? ②将编码毒素蛋白的 DNA 序列，注射到棉受精卵中 ? ③将编码毒素蛋白的 DNA 序列，与质粒重组，导入细 菌，用该细菌感染棉的体细胞，再进行组织培养 ? ④将编码毒素蛋白的 DNA 序列，与细菌质粒重组，注 射到棉的子房并进入受精卵 ? A ．①②