生物化学 第四章酶课件.pptVIP

三 . 米氏方程的推导 根据中间产物学说，酶促反应分两步进行 : Km 值表示酶与底物之间的 亲和程度 ： Km 值大表示亲和程度小， 酶的催化活性低 ; Km 值小表示亲和程度大 , 酶的催化活性高。 四 . 米氏常数 Km 的意义 1. 米氏常数的含义 由米氏方程可知，当反应速度等于最大反应速度一半时 , 即 V = 1/2 V max, K m = [S] 上式表示 , 米氏常数是 反应速度为最大值的一半时的底物浓 度 。因此 , 米氏常数的单位为 mol/L 。 2. 酶的特征物理常数 不同的酶具有不同 Km 值，它是酶的一个重要的特征物理常 数。 Km 值只是在固定的底物，一定的温度和 pH 条件下， 一定的缓冲体系中测定的，不同条件下具有不同的 Km 值。 3. 表示酶与底物之间的 亲和程度 V= Vmax [S] Km + [S] 4 . 判断酶的最适底物 Km 最小的底物 5 . 计算一定速度下的底物浓度 V= 80% Vmax 时， (S)= ？ 由： 0.8 Km + 0.2 (S)= (S), 0.8 Km = 0.2 (S) (S)=4 Km 又 : V= 99% Vmax , (S)= 99 Km 6. 了解酶的底物在体内的浓度水平 Km ≈ (S) 7. 判断反应的方向 Km 最小的反应 8. 判断抑制作用的类型 1. 双倒数作图法 1 K m 1 1 ??? = ?? ? ??? + ?? V V max [S] V max 取米氏方程式的倒数形式： 五 . 米氏常数 Km 的测定 测定 Km 和 V 的方法很多，最常用的是 Lineweaver – Burk 的作图法 — 双倒数作图法 。 -4 -2 0 2 4 6 8 10 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1/[S](1/mmol.L -1 ) 1 / v 1/Vmax 斜率 =Km/Vmax -1/Km V= Vmax [S] Km + [S] V/(S) Vmax V Vmax/Km 斜率 =-Km 2.Eadie-Hofstee 方程 由： 方程两边乘以 Km + （ S ） / （ S ） V(Km+ （ S ） / （ S ） ) V=- Km(V/ （ S ） )+Vmax V V/(S) 作图 10 20 30 40 50 60 70 80 90 0 20 40 60 80 100 Temperature O C R e l a t i v e A c t i v i t y ( % ) 最适温度 第七节 影响酶促反应速度的因素 一 . 温度对酶反应的影响 ? 一方面是温度升高 , 酶促反 应速度加快。 ? 另一方面 , 温度升高 , 酶的高 级结构将发生变化或变性， 导致酶活性降低甚至丧失。 ? 因此大多数酶都有一个 最适 温度 。 在最适温度条件下 , 反应速度最大。 二 .pH 对酶反应的影响 ? 在一定的 pH 下 , 酶具有最 大的催化活性 , 通常称此 pH 为 最适 pH 。 速 度 酶浓度 三 . 酶浓度对酶反应的影响 在底物足够过量而其它条件固定的情况下，并且反应系 统中不含有抑制酶活性的物质及其他不利于酶发挥作用 的因素时，酶促反应的速度和酶浓度成正比 四 . 激活剂对酶反应的影响 1. 概念：凡是能提高酶活力的物质 ( 简单化合物 ) 都称为酶的 激活剂。 （ activator) 。 2. 成分：其中大部分是一些无机离子和小分子简单有机物。 如： Na + 、 K + 、 Ca 2+ 、 Mg 2+ 、 Cu 2+ 、 Zn 2+ 、 Co 2+ 、 Cr 2+ 、 Fe 2+ 、 Cl - 、 Br - 、 I - 、 CN - 、 NO 3 - 、 PO 4 - 、 GSH 、 VitC 等； 3. 功能： 1 ） . 这些离子可与酶分子上的氨基酸侧链基团结合， 可能是酶活性部位的组成部分， 2 ） . 也可能作为辅酶或辅基的一个组成部分起作用； 4. 特点： 1 ） . 一般情况下，