微生物检验操作作业规程.docVIP

微生物检验操作规程 1. 目标 建立微生物检验标准操作规程，确保检验操作规范化。 2. 范围 适适用于本企业相关微生物检验活动全过程。 3. 职责 3.1 微生物检验员负责微生物检验全过程； 3.2 QC主管负责监督检验本规程有效实施。 4. 操作规程 4.1 微生物检验玻璃器皿吸管洗涤 4.1.1 通常玻璃器皿（比如培养皿、试管、三角瓶等），可用毛刷及洗涤剂洗去灰尘、油垢，然后用自来水、蒸馏水充足冲洗，直至玻璃器皿内壁均匀分布一层薄水膜，即器壁既不挂水珠也无条纹，即洗涤达成标准。 4.1.2 玻璃器皿内有污迹不能洗净时，可浸泡于洗液中，待器皿中有机物氧化分解后，取出用自来水、蒸馏水冲洗洁净，备用。 4.1.3 新购玻璃器皿先用2％盐酸浸泡，再用用自来水、蒸馏水充足冲洗。 4.2 器皿包扎 4.2.1 试管：塞上胶塞，然后用牛皮纸或报纸把试管头包扎起来。做发酵试验时，将试管头塞上专用耐高温PVC试管帽。 4.2.2 三角瓶、抽滤瓶：将三角瓶（抽滤瓶）口塞上胶塞，然后用牛皮纸把塞头部包起来。 4.2.3 吸管：将耐高温移液枪头装盒，用用牛皮纸或报纸包裹。 4.2.4 平皿：10个为一组，用牛皮纸包裹。 4.3消毒和灭菌： 4.3.1 化学灭菌：此法适适用于微生物操作过程中不能加热、紫外线地方。如人手等。 （1）用75%乙醇溶液或0.1%新洁尔灭擦拭或浸泡。 （2）通常见1～2%甲醛液浸泡软管和用具。 （3）通常成品漂白粉有效成份是25～32% 。使用时配成有效成份2%溶液洒在地面或容器内，（对金属有腐蚀作用）放置10～15min后冲洗即可。 （4）氯灭菌剂能力以有效氯表示，将氯水配制成50～100PPm 有效氯溶液，可用于浸泡，冲洗和表面杀菌。但氯对金属有腐蚀作用。 4.3.2 物理灭菌： 4.3.2.1 干热灭菌：适适用于干燥玻璃器皿（吸管、平皿等）、金属器具（镊子等）、固体试液、液状石蜡等。灭菌条件通常选择在160℃干热空气灭菌2h。 （1）器具用牛皮纸或灭菌袋包（装）扎，放入金属容器内。 （2）器具在干燥箱加热前放入，每个器具之间留有足够空隙，使热 空气能通畅。 （3）关闭箱门接通电源，打开通气孔，使箱内湿空气能逸出，至箱内温度达成100℃时关闭。 （4）加热至160℃，保持2小时。 （5）切断电源，冷却至60℃ 时，打开箱门，取出灭菌器具，并打开箱顶通气口。 注：灭菌时必需注意温度不能超出180℃，以免使棉花、报纸烘焦；灭菌时不得打开箱门；干燥箱未冷却时，不要取出里面器具，预防内外温差过大造成玻璃器具爆炸 璃器具爆炸。 4.3.2.2 湿热灭菌：适适用于容器、培养基、无菌衣、胶塞和其它遇高温和潮湿不发生改变或损伤物品。详见《压力蒸汽灭菌器操作规程》。 （1）装入培养基瓶用胶塞盖上，再用牛皮纸包扎。 （2）瓶中培养液不要超出1L，不然灭菌不根本。 （3）容器上部应留有足够空间（通常不超出装量2/3），方便产生气泡。 （4）器具用牛皮纸包裹。 （5）器具组合和包裹应许可灭菌蒸汽接触所用物品。 （6）各类器具装入灭菌器时，相互间要留有空隙以使蒸汽自由流动。 4.4 无菌操作准备工作及注意事项 4.4.1 微生物室应定时按《微生物试验室管理规程》清洁。 4.4.2 微生物室使用前，应先打开紫外灯灭菌20～30min。 4.4.3 微生物室应备有专用剪刀、镊子、接种针，每次使用前后应灭菌消毒。 4.4.4 微生物室应备有75%酒精棉球；新洁尔灭消毒液内浸纱布数块，备用。 4.4.5 进入微生物，换专用鞋，穿好洁净服，离室时脱去洁净服和专用鞋，洁净服和专用鞋只准在微生物室内使用，不准穿到其它地方去，并定时洗换和消毒灭菌。 4.4.6 样品检验前应在原始统计本上统计名称、批号等内容，并在所用平皿或试管上具体统计样品序号、检验日期等内容。 4.4.7 无菌操作前，用75%酒精棉球擦手。 4.4.8 操作要正确快速，所用器皿均应是经过严格灭菌器皿。 4.4.9 检验完成，立即清理工作台，弃去不需要物品，打开紫外灯灭菌20～30min。 4.5 微生物检验用培养基、溶液配制、使用和储存 配制方法参见培养基说明书或检验标准项下要求配制。 4.5.1 水：电导率在25℃时不超出25μs/cm，除非另有要求要求。 4.5.2 称重和溶解： 保留培养基时间需视培养基中水份蒸发程度及有没有污染而定，已制备好培养基要保留于冰箱中。在冰箱中存放培养基在使用前要先置于室温30min，使其和室温一致再使用，因为气体溶解度可因温度上升而降低，尤其是乳糖胆盐发酵管内倒管会因温度上升而出现气泡，这一点必需注意。 4.5.3 pH 测定和调整： 用pH计测pH，必需时在