基因的转移与重组体的筛选和鉴定.docxVIP

第四章 基因的转移与重组体的筛选和鉴定 第一节 转化 基因片段在体外只是一段核酸分子，是化学物质，无法表现出遗传物质的生命活性。只 有当其存在于活细胞后， 生命的特征才能充分展示出来。 在分子克隆实践中， 在体外操作的核酸分子只有进入细胞以后才能达到克隆的目的。 一、 重组 DNA 分子转入原核生物细胞 重组质粒 DNA 分子转化大肠杆菌 转化（ transformation ）—— 重组质粒 DNA 分子通过与膜蛋白结合进入受体细胞，并在受体细胞内稳定维持和表达的过程。 转化不仅适合于大肠杆菌受体细胞， 而且适合于枯草杆菌和蓝藻等其他原核生物以及酵母等低等真核生物受体细胞。 （1） CaCl2 处理后的细菌转化或转染 、制备感受态细胞 受体细胞的细菌，经一定浓度的冰冷的 CaCl 2（ 50～ 100 mmol ／ L ）溶液处理后变成。 所谓感受态细胞 ，处在感受态状态的菌体有摄取各种外源 DNA 的能力。 转化：感受态的大肠杆菌细胞捕获和表达质粒载体 DNA 分子的生命过程； 转染：感受态的大肠杆菌细胞捕获和表达噬菌体 DNA 分子的生命过程； 好的感受态细胞，每微克的超螺旋质粒 DNA 可得 5× 107个转化体。 B、细胞转化（或转染）的具体操作过程： ① 将处于对数期的新鲜培养物于 0℃ 4000转 /分离心 10分，回收细菌细胞； ② 将细胞用 0℃的 0.1