蒺藜苜蓿CIM基因克隆及紫花苜蓿遗传转化.pdfVIP

摘要 摘要 CIM（Cytokinin InducedMessage）基因属于expansin-B2 家族，目前关于CIM 基因的研究集中在豆科植物的叶片发育方面。蒺藜苜蓿 （Medicago truncatula） 是一年生草本植物，具有生长速度快，染色体组数量少 （2n 16），转基因研究 过程中转化效率高等优点，是研究豆科植物遗传学的模式植物。紫花苜蓿 （Medicagosativa）因具有高蛋白含量，丰富的维生素和微量元素，产量高等优 点，成为人工种植范围最大的牧草之一。本研究旨在探究蒺藜苜蓿CIM 基因在 紫花苜蓿中表达是否对其叶片发育产生影响。 试验以蒺藜苜蓿R108 品种为材料，首先在蒺藜苜蓿中克隆出CIM 基因，该 基因编码区长度为828bp，编码275个氨基酸。而后将该基因连于3302-3flag 载 体上，构建植物表达载体。将构建的植物表达载体以农杆菌转化的方法导入紫花 苜蓿叶片中，通过植物组织培养获得转基因紫花苜蓿植株，观察转基因紫花苜蓿 的表型。 结果表明转入CIM 基因的紫花苜蓿复叶叶片出现发育异常现象，与野生型 紫花苜蓿相比，植株相对矮小，叶片呈现梨形，基部的分枝数量增加。同时，本 研究进一步完善了紫花苜蓿组织培养体系。 关键词：CIM 基因，植物组织培养，紫花苜蓿 I 缩略表 缩略表 缩略词 英文名称 中文名称 bp BasePair 碱基对 cDNA Complementary DNA 互补碱基DNA PCR Polymerasechain reaction 聚合酶链式反应 ddH O Distilledant deionizedwater 重蒸水 2 CTAB Cetytrimethy ammoniumbromide 十六烷基三甲基溴化铵 Rif Rifampicin 利福平 LB Luria-Bertani Culture LB 培养基 YEB YeastMannitolMedium YEB 培养基 Kan Kanamycin 卡那霉素 Tim Timentin 特美汀 Cef Cefalothin 头孢霉素 BST Basta 草铵膦 MS Murashige＆Skoogmedium MS培养基 2,4-D 2,4-Dichlorophenoxyaceticacid 2，4-二氯苯氧乙酸 6-Bap 6-Benzylaminopurine 6-苄基腺嘌呤 IAA Indole-3-aceticacid 吲哚-3-乙酸 III 蒺藜苜蓿CIM 基因克隆及初步鉴定