《细胞培养实验室的设置及设备》.docxVIP

一、细胞培养实验室的设置及设备 （一）细胞培养实验室的设置 组织细胞培养技术与其他一般实验室工作的主要区别在于要求保持无菌操 作，避免微生物及其他有害因素的影响。目前，超净工作台的广泛使用，很大程 度上方便了组织细胞培养工作，并使一些常规实验室有可能用于进行细胞培养。 细胞培养实验室应能进行六方面的工作：无菌操作、孵育、制备、活洗、消 蠹灭菌处理、储藏。 无菌操作区 （1）无菌操作室：无菌操作区只限于细胞培养及其他无菌操作的区域，最 好能与外界隔离，不能穿行或受其他十扰。 理想的无菌操作室应划为三部分： a） 更衣室一一供更换衣服、鞋子及穿戴帽子和口罩。 b） 缓冲问 位于更衣问与操作问之间，目的是为了保证操作问的无菌环 境，同时可放置恒温培养箱及某些必需的小型仪器。 c） 无菌操作问一一专用于无菌操作、细胞培养。其大小要适当，且其顶部 不宜过高（不超过2.5m）以保证紫外线的有效灭菌效果；墙壁光滑无死角以便 活洁和消蠹。工作台安置不应靠墙壁，台面要光滑压塑作表面，漆成白色或灰色 以利于解剖组织及酚红显示pH的观察。 无菌操作问的空气消蠹： 紫外线灯一-产生臭氧，并且室内温度及湿度均较高，不利于工作人员健康。 空气过滤的恒温恒湿装置 一-最好。 表1洁净室（区）空气洁净度级别表 洁净度级别尘粒最大允许数/立方米微生物最大允许数浮游菌/立方米 沉降菌/皿. 100 级 3,500 0 5 1 10000 级 350,000 2,000 100 3 100000 级 3,500,000 20,000 500 10 300000 级 10,350,000 60,000 - 15 无臭氧紫外线消蠹器 电子消蠹灭菌器一一在高压电场作用下，电子管的内外电极发生强烈电子轰 击，使空气电离而将空气中的氧转换成臭氧。 臭氧是一种强氧化剂，能同细菌的 胞膜及酶蛋白氢硫基进行氧化分解反应， 从而靠臭氧气体弥漫性扩散达到杀菌之 目的，消蠹时没有死角。消蠹后空间的残留臭氧只需 30?40min即能自行还原 成氧气，空气不留异味，消蠹物体表面不留残蠹。 （2）净化工作台：操作简单，安装方便，占用空间小且净化效果很好。一 股细菌培养室使用的净化工作台主要有两种： a）侧流式或称垂直式b）外流式或 称水平层流式。 净化工作台工作原理（大致相同） 一-通常是将室内空气经粗过滤器初滤， 由离心风机压入静压箱，再经高效空气过滤器精滤，由此送出的洁净气流以一定 的均匀的断面风速通过无菌区，从而形成无尘无菌的高洁净度工作环境。 侧流式工作台一一空气净化后的气流由左或右侧通过工作台面流向对侧， 也 有从上向下或从下向上流向对侧，形成气流屏障保持工作区无菌。工作台结构为 封闭式。 外流式（水平式）工作台一-净化后的空气面向操作者流动， 因而外方气流 不致混入操作，但进行有害物质实验操作则对操作者不利。 工作台结构为开放式 （已少用）。 净化工作台应用注意： （1） 净化工作台应安装在隔离好的无菌问或活洁无尘的房间内，以免尘土 过多易使过滤器阻塞，降低净化效果，缩短其使用寿命。 （2） 新安装的或长期未使用的工作台，工作前必须对工作台和周围环境用 真空吸尘器或不产生纤维的工具进行活洁工作，然后再采用药物灭菌法或紫外线 灭菌进行灭菌处理。 使用净化工作台前，应先用75 %洒精擦洗台面，并提前以紫外线灭菌 灯照射30?50min处理净化工作区内积存的微生物。关闭灭菌灯后应启动风机 使之运转两分钟后再进行培养操作。 净化工作区内不应存放不必要的物品， 以保持洁净气流流型不受十扰。 注意净化区内气流的变化，一旦感到气流变弱，如洒精灯火焰不动， 加大电机电压仍未见情况改变则说明滤器已被阻塞，应及时更换。一般情况下， 高效过滤器三年更换一次。更换高过滤器应请专业人员操作，以保持密封良好。 粗过滤器中的过滤布(无纺布)应定期活洗更换，时间应根据工作环境洁净程度 而定，通常间隔3-6个月进行一次。 净化工作台使用完毕应及时活理工作台面上的物品并用洒精擦洗台面 使之始终保持洁净。 净化工作台应定期进行功能测试，检查净化工作台各项工作指标是否 达到要求，例如进行无菌试验，定期检查台面空气的洁净度是否达标。 超净工作台的无菌程度检查超净工作台在消蠹处理后， 无菌试验前及操作过 程中需检查空气中菌落数；取直径约 90mm平也，在超净工作台内点燃洒精灯， 在洒精灯旁，以无菌操作，将平也半开注入溶化的营养琼脂培养基约 20ml,制 成平板，在30?35C预培养48小时，证明无菌后将平板3个，以无菌方式带 入超净工作台内左、中、右各放一个；打开平皿?盖扣置，平板在空气中暴露 30 分钟后将平皿?盖盖好，置30?35 C培养48小时，取出检查，100级活洁度要求： 3个平也上生长的菌落数平均不得超过 1个