造血干细胞定向分化扩增表现与移植.pptVIP

造血干细胞定向分化扩增表现和移植 集落形成的关键是培养体系（细胞因子和血清等） CFU-GM和总CFC常用作评估外周血移植物质量的指标 骨髓象分析 遗传学、免疫学及分子生物学分析 配型 采集HSC 预处理：TBI (total body irradiation） 回到层流病房 HSC输注 造血干细胞移殖流程 第二节 造血干细胞的动员、采集、处理 造血功能恢复 动员 采集 冻存 预处理 回输 一. 外周血造血干/祖细胞动员 动员的机制 “造血动员式”化疗 化疗动员的具体方案 造血因子的使用 化疗与造血因子联合 动员剂将造血干细胞动员到外周血。 化疗药物:反馈性造血增生。 造血细胞因子:刺激造血细胞增殖及向髓外转移。 动员前: PB CD34+ 0.1-0.2%， 动员后： 1-2% （一）动员的机制 具体方案 大剂量单一化疗药物： CTX (cytoxan,环磷酰胺)- 4g-7g/m2 VP16 (etoposide，依托泊苷)- 2g/m2 Melphalan （马法兰）- 140mg/(m2, d1-2) 联合化疗 CTX 4g/m2, VP16 600mg/m2 （二）“造血动员式”化疗 （三）造血因子的使用 GM-CSF：Granulocyte-macrophage colony stimulating factor 粒—巨噬细胞集落刺激因子 G-CSF：Granulocyte colony-stimulating factor粒—巨噬细胞集落刺激因子 SCF：stem cell factor 干细胞因子 IL-3：interlukin-3 白介素-3 IL-11： interlukin-11 白介素-11 IL-8：interlukin-8 白介素-8 IL-1： interlukin-8 白介素-1 MIP-1：Macrophage Inflammatory Proteins 巨噬细胞炎症蛋白1 PIXY321：重组人GM-CSF/IL-3融合蛋白 （四）化疗与造血因子联合 化疗及G-CSF的联合动员 化疗及GM-CSF的联合动员 化疗及其他细胞因子的联合动员 IL-3 PIXY321 SCF 二 外周血造血干/祖细胞采集 （一）供者准备 患者用化疗药物及造血细胞因子联合动员 在白细胞数从最低点回升达到1X109/L时开始采集，有时延误到4X109/L。 常规使用ACD-A（acid citrate dexotrose solution A,酸性枸橼酸盐葡萄糖溶液）抗凝。 血细胞分离机：全自动、全封闭、连续和不连续、间歇的血细胞分离机。如CS3000plus每天一次，每次10L全血，可连续2-3次 (二)采集冷冻保存：分离外周血单个核细胞 1 采集的细胞数 评价移植物 是否足够 有核细胞总数：2-6 X 108/kg CFU检测 CD34+ 细胞数：1-3 X 106/kg ACD-A：大量使用时致ACD中毒引起低钙—少量。 容量不足：通过打断采集程序即不断减少流速来完成。 血小板减少症（thrombocytopenia）：由于血小板（platelet）粘附于设备表面引起的，通过回输富含血小板的血浆(platelet rich plasma, PRP)或输血小板来纠正。 2 采集并发症 3 处理 细胞浓度：5 X107/ml pH7 4℃保存 CFU最好。 4 进一步处理 富集CD34+, 去除肿瘤细胞，去除T细胞 5 冷冻保存 常温液态下储存几天，通常冷冻。 加入细胞保护剂DMSO。 6 长期储存 在-196℃液氮中至少5年。 在-80℃机械冰箱储存的时间最长为2.5年。 应装置24小时警备系统。 避免交叉感染的因素 如袋子之间用双腔袋、冷存时液态蒸发等。 四 解冻与回输 副反应：DMSO诱导组胺释放。 措施：患者要经过水化和用抗组胺药抗休克。 目的：减少血管塌陷和低血压。 第三节 CD34+细胞的分选 一 CD34+细胞的分选的必要性 在体外纯化和富集CD34+细胞。 在APBSCT中，净化残留肿瘤细胞而减少复发。 在allo-PBSCT中,去除T细胞, 减轻GVHD发生。 对难治性自身免疫性疾病，可纯化除去异常免疫细胞。 可提高干细胞体外扩增及基因转导的效率。 二 造血干细胞移植物中肿瘤细胞的污染 基因标记实验证实了一些肿瘤病人，自体移植后绝大数患者检出基因标记的肿瘤细胞。 用药物体外净化比未净化的移植复发率低。 残留肿瘤细胞再输入是肿瘤复发的重要因素。 因此，从自体移植物中清除污染的肿瘤细胞是十分必要的。