造血干细胞移植方法与在肿瘤治疗中应用HematopoieticStemCellTransplantationinCancerThearpy.pptVIP

造血干细胞移植方法和在肿瘤治疗中的应用HematopoieticStemCellTransplantationinCancerThearpy 外周血干细胞的动员与采集 （3）外周血干细胞动员的并发症及副反应 ①含有化疗动员方案的动员因在用药后多有白细胞和血小板的明显减少，故感染和出血为其主要的并发症。 ②含有造血生长因子动员方案的动员常可发生骨痛，以腰骶部和骨盆部的酸、胀、痛为突出，严重时呈全身骨痛，尤以健康供者表现突出。还可有胸膜渗出物，血管神经水肿和发热。使用GM-CSF时，常有发热及流感样症状，这些副反应均随着药物的停用而很快消失。无远期不良反应。 外周血干细胞的动员与采集 （4）外周血干细胞的采集时机 ①异体造血干细胞移植的动员以单纯细胞生长因子进行多在第5、6天时CD34+细胞达峰值，因而多在动员第5、第6天时采集。 ②自体造血干细胞移植的动员以化疗加细胞生长因子动员为主，CD34+细胞峰值在白细胞快速回升时达峰值，最佳时机是白细胞快速回升至5×109/L左右时。 ③动态监测CD34+细胞比值的变化，以CD34+细胞值作采集标准，不论异体外周血干细胞移植还是自体外周血干细胞移植，一旦CD34+细胞1%即可采集。 外周血干细胞的动员与采集 （5）外周血干细胞的采集方法 ①设备：采集外周血干细胞用血细胞分离机 ②采集：用血细胞分离机对血液进行大量的体外循环处理，血流速度为30~80ml/分，一般处理3倍以上人体血容量（约12L），绝大部分可在一次采够移植所需细胞数。一次采不够可以在第2天重复进行，若2次仍采不够可进行3次。 ③外周血干细胞采集量：a、异体外周血干细胞，单个核细胞数为5~8×108/kg体重，CD34+细胞数为2~5×106/kg体重，CFU-GM数为2~5×105/kg体重；b、自体外周血干细胞：单个核细胞数为2~5×108/kg体重，CD34+细胞数为2×106/kg体重，CFU-GM数为2×105/kg体重。 ④影响外周血干细胞采集的因素：a、动员效果不佳；b、采集时机不当；c、采血通路与返血通路不通畅；d、体外循环血量不足。 造血干细胞保存 （一）造血干细胞的保存 造血干细胞保存是造血干细胞治疗技术的重要组成部分，现己广泛用于临床， 主要用于自体造血干细胞移植，脐血干细胞的保存及移植，基因治疗、免疫治疗等方面。 造血干细胞的保存分为非冷冻保存和冷冻保存两大类。 造血干细胞保存 1、非冷冻保存 （1）保存方法 非冷冻保存最主要的保存方式是4℃冰箱保存， 将经肝素抗凝采集的，含有1/3组织培养液MPI1640或TC199保养液的骨髓或细胞浓度为5×107/ml以下， 细胞在4℃保存不同时间后细胞回收率结果在各个实验室有差异。但总的情况是：细胞在4℃保存24h其细胞数及活率基本是稳定的，保存3~4天后一般下降为原来的50~80%。 目前在临床应用4℃保存的造血干细胞进行造血干细胞移植时，一般均选择在72h以内回输。实践证明，4℃保存72h内的造血干细胞进行自体移植，移植后病人造血均能顺利重建。 造血干细胞保存 1、非冷冻保存 （2）保存特点 1、不需要特殊设备，简便易行，在基层医院均可进行。 2、细胞不经冷冻过程，无冷冻损伤，回输后造血恢复快。 3、细胞液中不含冷冻保存液，回输时无相关副作用。 4、保存时间短，应用受限，仅适用于预处理方案时间短的造血干细胞移植情况。 造血干细胞保存 2、冷冻保存 冷冻保存即零下温度保存，是将造血干细胞降温到零下某一温度，使细胞代谢停止后保存于零下温度， 这是造血干细胞安全可靠的保存方式，可使造血干细胞长久保存。 目前广泛使用的方法有两种。 造血干细胞保存 （1）程控降温冻存： 造血干细胞（骨髓需先进行冷冻前的分离、浓缩处理）在自体血浆或血浆蛋白浓度为5%保护液中，细胞终浓度在3×107~8×108/ml之间，然后缓慢加入冷冻保护剂二甲基亚砜（DMSO），终浓度为10%，分装于冷藏袋内。 在程控降温仪内以每分钟1℃~2℃的降温速度进行降温处理，当被冻存细胞降温到-50℃时，则以每分钟下降5℃的速度继续降温，当冻存细胞温度达-80℃后，即放入液氮中（-196℃）长期保存。 程控降温冷冻是最安全可靠的造血干细胞长期保存方法。但所需设备价格昂贵，冷冻耗时过长。 造血干细胞保存 （ 2）非程控降温冷冻保存 造血干细胞不通过程控降温直接冷冻保存于-80℃冰箱的方法，称为非程控降温冷冻保存。 该方法是将造血干细胞（分离、浓缩的骨髓、脐血或外周血干细胞）用5%的DMSO+6%羟乙基淀粉（HES）+4%人血清蛋白做为保护剂，调整细胞终浓度1~4×108/ml分装于冷藏袋内，直接放入-80℃冰箱里冷冻保存。 这种方法是较简单可靠的方法，且易进行重复操作。但冻存时间不如