香椿组培细胞的激素效应及成年叶黄酮分布的测定分析.pdfVIP

摘 要 本课题以香椿为实验研宄对象，探究了不同激素作用下对香椿组织培养、愈 伤诱导、活性物质含量及同エ酶活性与酶谱的影响，同时又对红、黑和青油椿树 干不同部位成年叶中黄酮物质含量分布进行测定分析。 1 .通过培养基的选择和不同植物激素的配比，筛选出高效生根和芽増殖培 养基以及利于芽苗健壮培养的激素培养基。结果发现 ：WPM 较 MS 和 1/2MS培 养基更利于香椿组培苗生长 ，最佳生根激素培养基为MS + IBA0.5mg/L + NAA 0.25 mg/L ，此时组培苗生根率为86.7%;赤霉素浓度适当提高后利于丛生芽増殖， 最佳增殖激素组合及浓度为在M S培养基中加入 1.0mg/L6-BA ，O.lmg/LNAA和 0.5mg/LGA3 ，此时统计得到丛生芽増殖倍数达5.9倍 ，而在对生根组培苗进行 壮苗培养时，在 MS + 1.0mg/LKT +O.lmg/LNAA+ 0.5mg/LGA3+0.5g/L AC 激 素培养基中培养出的组培苗茎段粗牡 ，叶片墨绿 ，生长旺盛 ，进ー步壮芽培养时 发 现 6-BA与 IAA 组合后效果优于与NAA 组合 ，在6-BA浓度为 2.0mg/L，IAA 浓度为0.05mg/L时，丛生芽壮芽效果最好 ，此时芽高3.34±0.13cm ，增殖倍数 为 3.88 。 2 .在愈伤诱导，细胞分化培养及代谢物质含量初步测定中发现 ：WPM 不适 合作为愈伤诱导基本培养基，在 M S培养基中2.4-D添加量为 1.5mg/L时，组培 苗愈伤诱导效果最好 ，室外香椿在2.4-D浓度为2.0mg/L时，诱导效果最好 ；有 芽点愈伤细胞团中，在 MS+1.0mg/L6-BA+0.1 mg/L NAA培养基培养后有很好 丛生芽生成效果，在 MS+ 1.0mg/LKT +O.lmg/LNAA培养基中，叶片愈伤细胞 团和有芽点细胞团均能生出多条白色側根，芽点会分化长出单个健壮新植株 ；叶 I 片愈伤快速分化培养时，在 MS+ 0.5mg/LKT+ 1.0 mg/L6-BA+O.lmg/LNAA + 0.05mg/LIAA激素培养基中生长迅速 ；二次继代培育过程 中，改变 GA3浓度 ， 有 引发次生代谢物质总黄酮和总皂苷含量变动趋势 ，在MS+1.0mg/LKT + 0.1mg/LNAA + 0.5g/LAC培养基生产出的愈伤细胞中测得的这两种物质含量相 对较高。 3 .单独添加2.4-D以及6-BA和 NAA 组合使用后，在愈伤细胞诱导三个生 长 时 间段 （6 天 、12天 、18天 ）中对同エ酶POD和 O酶谱和酶活性有如下 影响：经过激素诱导愈伤后，细胞中测得的POD和 O酶活性和酶谱条带因培 育时间和激素种类存在明显差异 ，在诱导12天后整体测得酶活性较高，在 MS+ 1.5mg/L2.4-D培养基中，愈伤细胞中测得的POD酶活性最高，POD酶经过凝胶 电泳 ，在各组中出现6-7条酶谱，条带II 、III、V 和VI在不同激素诱导细胞中表 现相对稳定； O酶整体显现出9 条酶谱，其中条带I 、II、III以及IX 因激素种 类和诱导时间不同，变动较太 ，而条带IV 、VI 、W. W 则在各组中相対稳定。 4 .采用高效液相色谱法对不同品系（黑油椿、红油椿、青油椿）香椿成年 叶在树干中不同生长部位 （上部、中部、下部）其中所含的黄酮类物质进行分析 测定，为研宄黄酮物质在香椿体内动态变化规律提供一定参考作用。在实验中， 得到的结论主要为：红油椿树干中部叶片黄酮类物质 上部叶 下部叶，在黑油 椿和青油椿中，均在树干上部叶片中测得较高黄酮类物质；单种物质中，芦丁和 槲皮素在黑油椿和红油椿中含量较高，最高部位为黑油椿上部叶片中，异槲皮苷 在青油椿中含量较高，最高在青油椿上部叶片中，三种物质综合测定结果表明黄 酮类物质含量较高的部位与品种依次是黑油椿上部叶 红油椿中部叶 青油椿 上部叶。 关键词 ：香椿组培；激素配比；愈伤诱导；同エ酶；高效液相色谱