灭菌及的无菌空气制备.pptVIP

发酵的一般流程 培养基配制 种子扩大培养 空气除菌发酵设备 培养基灭菌 发酵生产 下游处理  第五章灭菌及无菌空气制备 发酵工程无菌技术: 纯培养发酵技术:发酵全过程只有生产菌,无杂菌 在发酵过程中夹杂其它杂菌造成的不良后果 杂菌污染使基质或产物被杂菌消耗,造成生产能力下降 杂菌产生的某些代谢产物,改变了培养液的理化性质,使提取 精制发生困难; 杂菌可能会降解目的产物,使得生产过程失败; 杂菌会污染最终产品; 发酵时如污染噬菌体,可使生产菌发生溶菌现象,使生产失败  为了保证培养过程的正常进行,在接种要培养的微生 物之前,需要进行灭菌与消毒。 灭菌对象:培养基;设备与管道;空气系统;流加料、消泡剂 必要时还有对生产环境进行消毒,防止杂菌和噬菌体 工业上具体措施包括: 1)使用的培养基和设备须经灭菌; 2)好氧培养中使用的空气应经除菌处理 3)设备应严密,发酵罐维持正压环境; 4)培养过程中加入的物料应经过灭菌; 5)使用无污染的种子。  消毒与灭菌在发酵工业中的应用 消毒( disinfection):用物理或化学方油杀死物料、容景暴具 内外病原微生物,而对被消拳的物体基本无害的措施。 般只能杀死营养细胞,例如巴氏消法(60℃,30min)。 天菌( sterilization):用物狸或化学方法杀死或除去物料、 空气容縣等环境中所有微生物,包括苦养细胞、细黄荠 抱和孢子。 关系:消毒不一定达到灭菌的要求,而灭菌可以达到消毒的目的。  常用消毒、灭菌原理与方法 化学药剂消毒:甲醛或新洁尔灭、高锰酸钾等 使蛋白质凝固变性、酶失活;破坏细胞膜; 物理方法 辐射灭菌:紫外线、X射线,高能辐射与菌体核酸光化学反应 干热灭菌法:氧化作用、高温使蛋白质变性和电解质浓缩中毒 湿热灭菌法(最常用):蒸汽热使蛋白质变性,大分子氢键收 到破坏; 过滤介质除菌V:微生物不能透过滤膜而除菌  湿热天菌法 ·蒸汽具有强的热穿透力,灭菌易于彻底,效果最好,应用 饱和蒸汽进行灭菌最为普遍 适用范围:广泛应用于生产设备及培养基的灭菌 例如:实验蜜内的高压燕汽天菌、发酵车问采用的 设备空峭和培养基实峭。  过滤介质除菌法 过滤介质除菌 釆用适当的过滤介质对热敏性的液体或气体进行过 滤,去除微生物的方法。 液体:0.22um或0.45μm滤膜 气体:纤维介质滤材捕捉极微小的悬浮微生物 适用范围:对压缩空气制备无菌空气;酶溶液、啤 酒及其他不耐热化合物溶液除菌  第一节培养基和发酵设备的灭菌 高压蒸汽灭菌利用饱和蒸汽的高温杀死微生物的同时 高温还可能造成培养基成分的损失。 培养基灭菌的要求: 达到要求的无菌程度 尽量减少营养成分的破坏。在灭菌过程中,培养基组分的 破坏,是由两个基本类型的反应引起的 培养基中不同营养成分间的相互作用 对热不稳定的组分如氦基酸和维生素等的分解 ·合理选择灭菌条件的关键:了解灭菌温度、时间对微生物 死亡和培养基成分破坏的关系。  致死温度:杀死微生物的极限(最低)温度。 在致死温度下,杀死全部微生物所需要的时间成为致死时间; 在致死温度以上,温度愈高,致死时间愈短。 多数细菌芽孢的杀灭温度和时间 温度/℃100110115121 时间/mi15 某些细菌芽孢在湿热灭菌时的死亡温度和时间 灭菌时间、是度10010511011512012513013 孢名称 炭疽杆菌 枯草杆菌数小时 腐化厌氧菌780170 破伤风梭菌5-905-25 韦氏梭菌5~455~27 ~15 肉毒梭菌300-53040-12032~9010~404~20 土壤细菌数小时420120 嗜热细菌 400100~3004~11011~153.9~8.03.5 生孢梭菌  、培养基的灭菌温度选择 用湿热灭菌方法对培养基灭菌时,加热的温度和时间 对微生物死亡和营养成分均有破坏作用,因而选择一种既 能达到灭菌要求又能减少营养成分被破坏的温度和受热时 间,是研究培养基灭菌质量的重要内容。 培养基的营养成分的破坏和菌体死亡都符合 Arrhen ius Equat ion方程 A—比例常数; E—反应所需要的活化能,J/mol; K=A·e-ERR—气体常数(此处为4.1868×1.98J/(ml·K) T—绝对温度,K。 微生物 K E1 K nK=R71-2 K E K K2 n 反应速度常数增加的倍数 K 营养成分 K值为比死亡速率