分子生物学与细胞生物学实验基本关键技术.doc

分子生物学和细胞生物学试验基础技术 -02 试验一 组织块培养法 一、目标 学习原代培养方法，从供体取得组织细胞后在体外进行首次培养。 二、概述 组织块培养法是常见、简便易行和成功率较高原代培养方法。能够采取剪切法，立即组织块剪切成小块后，接种于培养瓶，组织小块贴壁24h或更长时间后，细胞就从组织四面游出。但因为在反复剪切和接种过程中对组织块损伤，并不是每个小块全部能长出细胞。用于组织块培养培养瓶可依据不一样细胞生长需要作合适处理，如预先涂以胶原薄层，以利于上皮样细胞等生长。（本节以新生牛主动脉平滑肌培养为例） 三、材料 仪器 净化工作台 恒温水浴箱 冰箱（4℃、-20℃） 倒置相差显微镜 培养箱 玻璃器皿 培养皿（Φ100mm） 吸管（弯头） 烧杯（500ml、200ml、10ml） 广口试剂瓶（500ml） 玻璃瓶（250ml、100ml） 培养瓶 废液缸 塑料器皿 吸头 枪头 胶塞 EP管 其它物品 微量加样枪 眼科组织剪（直尖、弯） 眼科组织镊（直、弯） 12.5cm组织镊（无钩、1×2钩） 25cm敷料镊（无钩） 止血钳（18cm直纹式、12.5cm直纹式、弯纹式） 解剖剪 试剂 D-Hanks液 小牛血清 RPMI1640 双抗（青霉素、链霉素） 1N HCl 7.4%NaHCO3 四、操作步骤 取材：打开胸腔，无菌操作下取出主动脉胸段，浸到预先配制好含双抗（500