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Chapter 3 The Extraction, Separation and Purification of Enzyme 酶的提取与分离纯化 补充:发酵液的预处理 固液分离 (1)菌种 (2)培养基 (3)无机离子的去除 (4)杂蛋白质的去除 (5)色素及其他物质的去除 主要方法是离心分离和过滤 Contents of chapter 3 、酶的提取与分离纯化技术路线 2、细胞破碎 3、酶的提取(重点) 4、酶的分离方法(重点) 5、酶的组合分离纯化策略 6、酶的浓缩、干燥与结晶 31酶的提取、分离纯化技术路线 细胞破碎←动物、植物或微生物细胞 酶提取←发酵液 酶分离纯化 酶浓缩 离心分离,过滤分离,沉淀分离, 酶贮存 层析分离,电泳分离,萃取分离, 结晶分离等 V32细胞破碎 JY92ⅢD超声波 许多酶存在于细胞内 细胞粉碎机 压 为了提取这些胞内酶, 首先需要对细胞进行 破碎处理 机 (1)机械破碎 (2)物理破碎 (3)化学破碎 画 细胞破碎珠 DY89I型电动玻璃匀浆机 (4)酶解破碎 冷各种微生物细胞壁的结构与组成 生,革兰氏阳性細「革兰氏阴性「放线 酵母菌 霉菌 物 菌 细菌 菌 壁厚/ 15~50 10~13 同G 100~300 100~250 nm 层次 单层 多层 多层 多层 主要肽聚糖 肽聚糖 葡聚糖(30%~40%)多聚糖 组成(40%-90%)(5%-10%) 甘露聚糖(30%)(80%-90%) 多糖 脂蛋白 几丁质(1%~2%) 脂类 胞壁酸 脂多糖 蛋白质(6%-8%)蛋白质 蛋白质(11%~22%) 脂类(8.5%~13.5%) 脂多糖 磷脂 (1%∽2%) 蛋白质 ◆细胞破碎方法及其原理 捣碎法 机械破碎。通过机械运动产生的剪切力,使 研磨法 组织、细胞破碎。 匀浆法 温度差破碎法 物理破碎一纽织、细胞的外层结构破坏,一压力差破碎法 而使细胞破碎 破碎法 化学破碎一通过各种化学试剂对细胞膜的作有机溶剂: 表面活性剂 通过细胞本身的酶系或外加酶制 酶促破碎一剂的催化作用,使细胞外层结构→自溶法 受到破坏,而达到细胞破碎 外加酶制剂法 ◇细胞对破碎方法的敏感性 细胞 声波机械渗透压温度差 动植物 +十 革兰氏阴性菌 革兰氏阳性芽孢菌++ 酵母 革兰氏阳性球菌 菌丝 孢子 33酶的提取 ◇定义 指在一定的条件下,用适当的溶剂或溶液处 理含酶原料,使酶充分溶解到溶剂或溶液中的过 程 目标 将目的酶最大限度地溶解出来 保持生物活性 ◆原则 根据酶的结构和溶解性质,选择适当的溶剂。 13.3酶的提取 令方法 提取方法使用的溶剂或溶液 提取对象 盐溶液提取002-0.5moL提取在低浓度盐溶液中溶 盐溶液 解度较大的酶 酸溶液提取|pH2-6 提取在稀酸溶液中溶解度 水溶液 大,且稳定性较好的酶 碱溶液提取pH8-12 提取在稀碱溶液中溶解度 水溶液 大且稳定性较好的酶 有机溶剂提取与水混溶的有机提取与脂质结合牢固或含 溶剂 有较多非极性基团的酶