本科课件-电子显微镜技术（完整）.ppt

自然断面：无明显界限的匀质性、细颗粒状处的断面， 如细胞质、核质以及细胞内外间隙。 2.细胞断面： 自然断面 劈裂面 劈裂面：指有明显界限的“生物膜”处的断面，如细胞膜、 线粒体膜、核膜等细胞器的膜。 劈裂面的特点：一般沿膜的不同深度、不同角度以及不同 层次断裂，大面积暴露出各种膜的表面结构。这时可 以观察到利用超薄切片及扫描方法难以观察到的膜层 结构。 3..膜片的命名： 通用命名法： E膜—与细胞外间隙或细胞内间隙（包括核周间隙，线粒 体内、外膜之间的腔以及高尔基体、内质网、溶酶 体、吞饮泡的腔）相邻的一片，也叫做外片。 P膜—与细胞质、核质、或线粒体基质相邻的一片，叫胞质 片或内片。 细胞内 细胞外 E膜 P膜 细胞膜的劈裂面模式图 2.膜的劈裂面的命名： PS面：与细胞质、核质、线粒体基质相邻P膜的亲水面 ES面：与细胞外间隙或细胞内间隙相邻的E膜亲水面 PF面：面向细胞外间隙、核周间隙以及线粒体膜间隙的 疏水层劈裂面（P膜的疏水表面）。 EF面：面向细胞质、核质、线粒体基质的疏水层劈裂面 （E膜的疏水表面） E膜 P膜 外环境 内环境 EF面 PF面 PS面 ES面 冷冻断裂复型图像与扫描表面图像的比较 家兔支气管表面的纤毛结构 超薄切片图像与扫描表面图像的比较 大 肠 杆 菌 扫描 图像 与 透射 超薄 切片 图像 及 透射 负染色 图像 的 比较 胞间联丝 谢谢大家！ 再见！ 通知 考试时间：5月15日（下周三）8：00~10：00 考试地点： 实验时间： * 当当 * KV从 取材 清洗 固定 脱水 干燥 粘样 镀膜 镜检 1.单固定：只用一种固定剂（通常戊二醛）固定的方法。 2.熏蒸固定：固体培养基上培养的菌丝类样品， 用锇酸（或甲醛）蒸汽熏蒸固定0.5~1小时。 3.双固定： 戊二醛(1~3h)—锇酸(0.5~1h) 4.冷冻固定：液氮超低温快速冷冻可保存样品的生活状态。 5.不固定：干种子、花粉、孢子类、毛发类样品。 四、脱水：梯度系列脱水法。 注意：根据材料性质和大小而调节脱水时间。 三、固定方法 取材 清洗 固定 脱水 干燥 粘样 镀膜 镜检 五、干燥： 指除去样品中的残存液体（水或脱水剂）， 使样品中不含液态物质的过程。 原因：液态物质脱离样品表面时必须克服表面张力， 其反作用力会使样品表面结构产生形变。 1.自然干燥法：样品中的水分或脱水剂在大气中自然蒸发使样品干燥。 适宜样品：花粉、孢子、种子、果壳、木质纤维、骨骼； 游离细胞类在脱水剂中自然干燥较好。 特点：经济便捷。 2.真空干燥法： 含水分或脱水剂样品置于真空干燥器内， 抽低真空使液态物质挥发，使样品干燥。 特点：干燥速度快，效果与自然干燥法相近。 3.冷冻干燥法：超低温快速冷冻 取材 固定 脱水 制冷剂 真空升华 粘样 液氮、丙烷 取材 清洗 固定 脱水 干燥 粘样 镀膜 镜检 样品干燥法 4.临界点干燥法（critical piont drying method CPD) (1)干燥原理： 在密闭容器中加热，使液态干燥剂 变为气态，当气态与液态物质的密 度相等时，相界消失。这时液态干 燥剂的分子内聚力为零，此时液体 的表面张力系数为零(即临界状态)。 在临界状态下继续对容器加热，同 时以一定速度排出气体（保持临界状态）， 直到排净为止。这时样品在无表面张力 影响的临界状况下得以干燥。 使干燥剂气相与液相相等的温度称为该干燥剂的临界温度。 使干燥剂气相与液相相等的气压称为该干燥剂的临界压强。 加热器 CO2 CO2↑ 取材 清洗 固定 脱水 干燥 粘样 镀膜 镜检 临界点干燥法 （2）常用干燥剂与中间剂： 常用干燥剂： 中间剂：既可以与干燥剂，又能与脱水剂相混溶的液体， 先置换脱水剂而后又被干燥剂所置换。 常用中间剂：醋酸异戊脂，醋酸戊脂。 干燥剂：在临界点干燥器内起临界干燥作用的液体. 液态CO2：,临界温度为31.1℃，临界压强72.8标准大气压。 F12 ： 临界温度 28.9 ℃ ，临界压强38.1标准大气压。 取材 清洗 固定 脱水 干燥 粘样 镀膜 镜检 (3)干燥步骤： 第一步：中间剂置换脱水剂：2次/10~15分钟； 第二步：干燥剂置换中