农杆菌介导甜菜遗传转化技术规程 __DB15_T 2044—2020 内蒙古.pdfVIP

ICS 65.020.20 CCS B 05 DB15 内 蒙 古 自 治 区 地 方 标 准 DB15/T 2044—2020 农杆菌介导甜菜遗传转化技术规程 Technical code of practice for Agrobacterium-mediated Sugarbeet Genetic Transformation 2020-12-24 发布 2020-01-24 实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发 布 DB15/T 2044—2020 前 言 本文件按照GB/T 1.1-2020 《标准化工作导则第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由内蒙古自治区农牧厅提出。 本文件由内蒙古自治区农业标准化技术委员会(SAM/TC 20)归口。 本文件起草单位：内蒙古自治区农牧业科学院。 本文件主要起草人：张自强、白晨、李晓东、张惠忠、王良、韩平安、张必周、付增娟、赵尚敏、 鄂圆圆、郑文哲、张辉。 I DB15/T 2044—2020 农杆菌介导甜菜遗传转化技术规程 1 范围 本文件确立了培养基、灭菌、无菌苗培养、侵染液制备与叶片-叶柄预培养、遗传转化、生根培养、 移栽和目的基因检测等技术要求。 本文件适用于农杆菌介导甜菜遗传转化技术操作的全过程。 2 规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件。 3 术语与定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 种球 bulb 甜菜的果实。 3.2 植物遗传转化 plant genetic transformation 将外源基因转移到植物体内并稳定整合、表达和遗传，从而使受体植物体现转移基因的特征的过程。 3.3 农杆菌侵染 infection 农杆菌侵入并感染甜菜外植体的过程。 3.4 叶片-叶柄 leaf-petiole 甜菜无菌苗叶片和叶柄相连接的部位，长约 1 cm。 4 培养基 4.1 琼脂粉培养基 用于甜菜种球的萌发。成分为（1 L）：琼脂粉7.5 g，pH=5.8。 1 DB15/T 2044—2020 4.2 诱导分化培养基 用于甜菜无菌苗诱导分化培养和甜菜叶片-叶柄的预培养。成分为（1 L）：MS培养基4.74 g，蔗糖 30 g，NAA （萘乙酸）0.7 mg，KT （激动素）1.2 mg，琼脂粉7 g，pH=5.8。 4.3 生根培养基 用于甜菜无菌苗的生根培养。成分为（1 L）：MS培养基4.74 g，蔗糖30 g，NAA 1.2 mg，琼脂粉 7.5 g，草甘膦0.08 µM，pH=5.8。 4.4 YEP 培养基 用于工程农杆菌的增值培养。成分为（1 L）：牛肉浸膏5 g，酵母提取物10 g，氯化钠5 g，琼脂 粉15 g，rif （利福平）50 mg，kan （卡娜霉素）50 mg，pH=7.0。 4.5 侵染液培养基 用于加入农杆菌菌液配制侵染液。成分为（1 L）：MS 培养基 4.74 g，蔗糖 30 g，NAA 0.7 mg， KT 1.2 mg，AS(乙酰丁香酮)150 µM，pH=6.8。 4.6 共培养培养基. 用于侵染后甜菜叶片-叶柄与农杆菌的共培养。成分为（1 L）：MS