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拟南芥GSK3 家族成员AtSK11 和AtSK12 在轻度渗透胁迫下调控根伸长机制的研究 目录 目录 I 摘要IV Abstract VI 缩略语表IX 1 前言 1 1.1 渗透胁迫 1 1.1.1 植物渗透胁迫响应的机制 1 1.1.2 根系在渗透胁迫响应中的作用6 1.1.3 适当的渗透胁迫促进植物根的生长7 1.2 GSK3s 在动物和植物中的功能研究7 1.2.1 GSK3s 在动物中的功能研究8 1.2.2 GSK3s 在植物中的功能研究 13 1.3 GSK3s 调控植物对盐胁迫和渗透胁迫的响应22 1.4 本研究的目的与意义24 2 材料与方法25 2.1 实验材料25 2.1.1 载体材料25 2.1.2 植物材料26 2.1.3 实验菌株27 2.1.4 实验试剂27 2.1.5 实验抗生素28 2.1.6 实验抗体29 2.1.7 实验仪器29 2.1.8 数据分析及图像处理软件30 2.2 实验方法31 2.2.1 植物材料培养，杂交，转化31 2.2.2 渗透胁迫处理及水势测定33 I 华中农业大学2020 届博士研究生学位（毕业）论文 2.2.3 载体构建34 2.2.4 GUS 染色35 2.2.5 植物总RNA 提取与qRT-PCR 36 2.2.6 植物总DNA 提取37 2.2.7 RNA-seq 样品准备和数据分析38 2.2.8 启动子Motif 富集分析38 2.2.9 蛋白互作39 2.2.10 体外激酶反应42 2.2.11 磷酸化质谱鉴定磷酸化位点43 2.2.12 双荧光实验（Dual-luc assay ）43 2.2.13 ChIP qRT-PCR 实验44 2.2.14 显微镜观察45 3 结果与分析46 3.1 AtSK11 和AtSK12 调节拟南芥根生长发育46 3.1.1 AtSK11 、AtSK12 和AtSK13 的组织定位46 3.1.2 AtSK11 、AtSK12 与AtSK13 的单突变体和多突变体的生长表型...48 3.1.3 AtSK11 和AtSK12 促进拟南芥根尖细胞分裂和根毛形成51 3.2 AtSK11 和AtSK12 调控植物对渗透胁迫的响应55 3.2.1 AtSK11 和AtSK12 抑制轻度渗透胁迫促进根生长的过程55 3.2.2 轻度渗透胁迫下AtSK11 和AtSK12 的蛋白丰度和定位变化60 3.2.3 鉴定AtSK11 和AtSK12 调控的轻度渗透胁迫响应基因62 3.2.4 轻度渗透胁迫响应基因的突变体水势表型分析67 3.2.5 AtSK11、AtSK12 和AtSK13 与转录因子LRL2 互作70 3.2.6 LRL2 调控根的生长并抑制下游轻度渗透胁迫响应基因的表达76 3.2.7 LRL2 抑制下游基因的启动子活性78 3.2.8 AtSK11、AtSK12 和AtSK13 磷酸化LRL2 82