微生物检验方法.docVIP

-1992 、FDA《 细菌分析手册―需氧菌平板计数 》，或 15～300 个（如 ISO 4833 : 1991 《 微生物学 大肠杆菌菌落计数通用指南最大可能数技术》）等。 菌落计数前先观察菌落生长情况，通常同一稀释度平板上菌落数应相近，不一样稀释度平板上菌落数则应和稀释倍数成反比。蔓延菌落生长会抑制其它菌株生长，或会覆盖其它小菌落，所以最好不要选择有蔓延菌落生长平板作为计数平板，但如必需选择，应在统计中标识清楚。如片状菌落不到平板二分之一，而其它二分之一中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘 2 以代表全皿菌落数。平皿内如有链状菌落生长时（菌落之间无显著界限），若只有一条链可视为一个菌落，假如有不一样起源几条链，则应将每条链作为一个菌落计。当每个稀释度制备了两块平板时，用所选择平板算术平均值来计算原始样品中微生物含量。样品菌落数等于每克或每毫升cfu值除以稀释度。 汇报方法： 空白对照试验： 2.2大肠菌群 大肠菌群或称总大肠菌群是指一群能在37℃ 埃希氏菌属，在此菌属中和人类生活亲密相关仅有一个种， 即大肠杆菌； 其次有柠檬酸杆菌属，其代表种有弗劳地枸橼酸杆菌； 克雷伯氏菌属，代表种为肺炎克雷伯氏菌； 肠杆菌属，代表种有阴沟杆菌和产气杆菌。 大肠菌群卫生学意义： 大肠菌群关键起源于人、畜粪便。大肠菌群是反应食品中是否存在粪便污染指示菌，食品中有粪便污染，则可推测该食品中存在着肠道致病菌污染可能性，潜伏着食物中毒和流行病威胁，同时也反应出被测食品对人体健康存在危害。大肠菌群检测已被广泛应用于食品卫生工作中。 检验标准通常使用GB/T 4789.3-、SN 0168-92 检验中需了解和注意事项： 1. 挑选菌落 在实际工作中，为了提升大肠菌群检出率，应该熟悉大肠菌群菌落色泽和形态。在GB/T 4789.3-检验方法中要求伊红美蓝平板为分离培养基，在该平板上，大肠菌群菌落呈黑紫色有光泽或无光泽，检出率为最高；红色、粉色菌落检出率较低。 2. 发酵管产气量 在日常工作中，有时在发酵倒管内有极微小气泡（有时比小米粒还小），有时可碰到在初发酵时产酸未产气，但在液面及管壁却能够看到缓缓上浮小气泡。这种情况大肠菌群阳性检出率能达成30%-50%。所以不能忽略产气量少，对未产气乳糖发酵管如有疑问时，能够用手轻轻打动试管，如有气泡沿管壁上浮，即应考虑可能 有气体产生，而应作深入试验。 3. 抑菌剂 大肠菌群检验中常见抑菌剂有胆盐、十二烷基硫酸钠、煌绿、龙胆紫、孔雀绿等。抑菌剂可抑制样品中—些杂菌，尤其是G+生长，而有利于大肠菌群生长和挑选。 GB/T 4789.3-中乳糖胆盐发酵管利用胆盐作为抑菌剂，SN 0168-92中LST肉汤利用十二烷基硫酸钠（月桂基）作为抑菌剂，BGLB肉汤利用煌绿和胆盐作为抑菌剂。 2.3金黄色葡萄球菌 金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、土壤、水、饲料、食品、灰尘及人和动物排泄物中全部能够存在。所以，食品受污染机会很多，是引发食品污染和细菌性食物中毒一个关键细菌。由金黄色葡萄球菌肠毒素引发食物中毒已成为世界性卫生问题。 一. 生物学特征： 1. G+、需氧或兼性厌氧，通常在肉浸液肉汤及肉浸液琼脂或加入血液培养基上生长良好。 2. 耐盐性强。10%-15%氯化钠培养基中能生长。 3. 在血琼脂上，几乎全部葡萄球菌可产生α、β、γ和δ溶血素（一个或一个以上）。多数致病菌株可产生透明溶血环，菌落呈金黄色，有时也为白色，大而突起、圆形、不透明、表面光滑，周围有溶血圈。 4. 葡萄球菌是无芽胞菌中抵御力最强者，耐干燥可达数月，加 热 80℃ 死亡。 l : 100000～00 龙胆紫溶液能抑制其生长。对磺胺增 效剂、青霉素、红霉素等较敏感，但耐药菌株逐年增多。 葡萄球菌肠毒素含有耐热性，加热 100℃ 要使其完全破坏需煮沸2h，这是葡萄球菌肠毒素特点 二. 毒素和酶 金黄色葡萄球菌致病力决定于细菌产生毒素和酶能力。致 病性菌株产生毒素和酶关键有下列多个： 1．血浆凝固酶：此酶由金黄色葡萄球菌产生，能使含抗凝剂 人或兔血浆发生凝固。血浆凝固酶试验是判定金黄色葡萄球菌关键标志。 2．溶血毒素：多数致病性菌株均能产生，包含 α、β、γ和 δ溶血素，对人致病关键是α-溶血素。 3．杀白细胞素：能破坏人和家兔中性粒细胞，抵御吞噬细胞 吞噬 。 4. 肠毒素：分 A 、B 、C 、D 、E 和 F 六个型别。耐热， 100 30min 不被破坏。金黄色葡萄球菌引发食物中毒以 A 型为多见，其次是 B 、 C 型。 5．剥脱毒素：由噬菌体 l 群中一些金黄色葡萄球菌菌株产生。 对新生儿和免疫功效低下成年人，可引发葡萄球菌烫伤样皮肤综合征。 三. 检验方法及判定 金黄色葡萄球菌检验方法关键有 GB/T4789.10-《食品卫