藤黄酸对LPS诱导的小鼠乳腺炎的作用及机制研究.pdfVIP

藤黄酸对LPS 诱导的小鼠乳腺炎的作用及机制研究 目录 摘要 i Abstract iv 缩略语表（Abbreviation ） ix 1 前言 1 1.1 问题由来 1 1.2 文献综述 1 1.2.1 奶牛乳腺炎的病因及危害 1 1.2.2 奶牛乳腺炎与机体免疫 2 1.2.3 奶牛乳腺炎与凋亡 2 1.2.4 奶牛乳腺炎与血乳屏障 3 1.2.5 奶牛乳腺炎与常规非中药防控方法 3 1.2.6 奶牛乳腺炎与中药防控方法 4 1.2.7 中药单体藤黄酸的作用机制研究及进展 4 2 研究目的与意义 9 3 材料与方法 10 3.1 试验材料 10 3.1.1 试验动物 10 3.1.2 试剂及耗材 10 3.1.3 试验仪器 11 3.1.4 工作液配置 11 3.2 试验方法 13 3.2.1 MMECs 提取 13 3.2.2 GA 对MMECs 活性影响 14 3.2.3 GA 对细胞中促炎因子的作用 15 3.2.4 体外模型构建 15 I 华中农业大学2020 届硕士研究生学位（毕业）论文 3.2.5 RT-qPCR 试验15 3.2.6 ELISA 检测相关炎性因子18 3.2.7 MMECs 总蛋白的提取19 3.2.8 BCA 测定蛋白浓度19 3.2.9 相关蛋白western blot 检测20 3.2.10 细胞免疫荧光检测21 3.2.11 流式细胞术活性氧检测22 3.2.12 线粒体膜电位及凋亡检测22 3.2.14 小鼠乳腺炎模型的评价24 3.2.15 病理切片制作及观察24 3.2.16 组织匀浆上清的制备27 3.2.17 试验小鼠血清的处理27 3.2.18 试验小鼠MPO 检测28 3.2.19 组织免疫荧光28 3.2.20 FITC- 白蛋白渗透性实验29 4 结果与分析30 4.1 藤黄酸对细胞活性的影响30 4.2 藤黄酸抑制LPS 诱导的促炎因子30 4.3 藤黄酸抑制LPS 对小鼠乳腺的损伤32 4.3.1 藤黄酸对小鼠乳腺炎组织作用效果及评估32 4.3.2 乳腺炎组织病理切片评价33 4.3.3 藤黄酸抑制乳腺炎小鼠血清中促炎因子的表达33 4.3.4 小鼠血清髓过氧化物酶检测35 4.4 藤黄酸抑制乳腺炎机制研究36 4.4.1 藤黄酸抑制LPS 导致TLR4 的激活36 4.4.2 藤黄酸抑制NF-κB 信号通路相关蛋白及基因的表达37 4.4.3 藤黄酸抑制MAPKs 信号通路相关蛋白及基因的表达39 4.5 藤黄酸对脂多糖诱导凋亡的影响41 II 藤黄酸对LPS 诱导的小鼠乳腺炎的作用及机制研究 4.5.1 藤黄酸抑制LPS 诱导的活性氧过度表达 41 4.5.2 藤黄酸抑制LPS 导致的细胞线粒体膜电位紊乱及凋亡 42 4.5.3 藤黄酸影响LPS 诱导的细胞凋亡蛋白及基因表达 43 4.5.4 藤黄酸影响LPS 诱导的乳腺组织中凋亡基因和蛋白的表达 46 4.6 藤黄酸保护小鼠乳腺组织中的血乳屏障完整性 48 4.6.1 藤黄酸提升血乳屏障紧密性 48 4.6.2 藤黄酸抑制LPS 诱导的紧密连接蛋白下调 49 5 讨论 51 5.1 LPS 诱导的乳腺炎模型 51 5.2 藤黄酸对促炎因子的影响 52 5.3 藤黄酸对TLR4-NF-κB 的影响 52 5.4 藤黄酸对MAPKs 信号通路的影响 53 5.5 藤黄酸对MMECs 中LPS 介导的MMP 和ROS 的影响 54 5.6 藤黄酸抑制LPS 导致的MMECs 凋亡 55 5.7 藤黄酸对血乳屏障的保护作用 55 5.8 藤黄酸用于防控乳腺炎等炎性疾病 56 6 结