捻转血矛线虫氨基肽酶的植物表达方法的建立及重组蛋白免疫效果评估.pdfVIP

捻转血矛线虫氨基肽酶的植物表达方法的建立及重组蛋白免疫效果评估 目录 中文摘要 i Abstract ii 缩略语表 iv 1 文献综述 1 1.1 捻转血矛线虫及危害1 1.1.1 捻转血矛线虫生活史及各阶段形态特征1 1.1.2 捻转血矛线虫病流行病学特征2 1.1.3 捻转血矛线虫病的危害、诊断及防控3 1.2 寄生蠕虫疫苗的研究进展5 1.2.1 血吸虫病和片形吸虫病的疫苗研究进展5 血吸虫疫苗研究进展5 片形吸虫疫苗研究进展8 1.2.2 绦虫疫苗的研究进展 10 1.2.3 线虫疫苗的研究进展 12 1.2.4 合成多肽类疫苗在寄生蠕虫领域的研究 17 1.3 捻转血矛线虫的疫苗研究 19 1.3.1 捻转血矛线虫疫苗的研究现状 19 1.3.2 捻转血矛线虫优势抗原分子 20 H11 20 Hc23 20 1.3.3 捻转血矛线虫抗原Hc-ap-5 、Hc-ap-8 、Hc-ap-10 和Hc23 的选择 21 1.3.4 疫苗免疫佐剂的选择 22 1.4 转基因植物表达抗原疫苗 22 1.4.1 植物表达系统的选择 23 1.4.2 转基因植物疫苗研究背景简述 24 1.4.3 植物表达制备寄生虫抗原的研究进展 24 1.4.4 转基因植物宿主的选择 25 2 研究目的与意义26 3 材料与方法27 3.1 实验材料 27 I 华中农业大学2020 届硕士研究生学位（毕业）论文 3.2 主要仪器设备 27 3.3 主要试剂 27 3.4 主要溶液配置 28 3.5 试验方法 30 3.5.1 捻转血矛线虫人工感染方法的建立 30 3.5.2 捻转血矛线虫各时期虫体的收集 30 3.5.3 捻转血矛线虫iL3 gDNA 的提取及鉴定 30 3.5.4 RNA 的提取及cDNA 的合成 31 3.5.5 Hc-ap-5 、Hc-ap-8 、Hc-ap-10 及Hc23 cDNA 的获取 33 3.5.6 PCR 产物琼脂糖凝胶电泳检测 34 3.5.7 PCR 产物纯化及回收 34 3.5.8 大肠杆菌感受态细胞DH5α 的制备 35 3.5.9 目的片段的连接与转化 36 3.5.10 菌液PCR 鉴定 36 3.5.11 碱性裂解法提取质粒 37 3.5.12 植物双元表达载体pRIEGFP 、pRIAP10 、pRIAP8 和pRIAP10op 的构建 38 3.5.13 pRIEGFP 、pRIAP10 和pRIAP8 烟草瞬时表达41 3.5.14 植物双元表达载体pH7AP8 和pH7AP10op 的构建42 3.5.15 pH7AP8 和pH7AP10op 农杆菌介导烟草瞬时表达43 3.5.16 pH7AP8 、pH7AP10 和pH7Hc23 核定位信号SV40 的添加44 3.5.17 原核表达载体pE-SUMO-Hc-ap-5 和pE-SUMO-Hc-ap-10 的构建46 3.5.18 pE-SUMO-Hc-ap-5 和pE-SUMO-Hc-ap-10 的诱导表达，纯化和Western Blot 鉴定47 3.5.19 原核蛋白HC-AP-10 和HC-AP-5 混合免疫山羊49 3.5.20 粪便虫卵计数 50 3.5.21 真胃成虫计数 50 4. 结果与分析51 4.1 Hc-ap-5、Hc-ap-8