SOP-Q C4-010大肠埃希菌检查SOP.docxVIP

部　 门 职务/岗位 签　 名 日 期 起草 质量控制室 化验员 技术审核 质量控制室 主任 法规符合性审核 质量保证室 质量运行岗 文件格式审核 质量保证室 文件管理员 批准 质量管理部 经理 生效日期 　年 　月 　 日 颁发部门 质量管理部 复审日期　 　　 　年 月　 　日 文件拷贝号 分发部门 质量管理部　　 　 设备部 　 物资部 　 　 总经理办公室 质量保证室 　销售部　 　 　 生产部　 　 　　车间 质量控制室 ●大肠埃希菌检查SOP 1.目得 　 建立一个规程,规范大肠埃希菌计数操作方法。 ２.范围 　本规程适用于ｘxxｘxxｘxｘｘ公司质量控制室对水质、碳酸钙成品及其她得微生物限度检查。 3。职责 QC检测人员负责按照本规程进行样品检测与记录;ＱC负责人及监管人员有权对检测过程及结果进行监督检查,有权制止不符合规程得操作并向QＡ提出重试请求,得到ＱA批准后方可进行重试、必须开启偏差记录来解决不符合规程得操作。 4. 物料与设备 4。1试剂与材料 　 pH7、０无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液: 取磷酸二氢钾3、56g、无水磷酸氢二钠5、77ｇ、氯化钠4、30g、蛋白胨1.00g,加水1000ｍl,微温溶解、滤清、分装、灭菌。 胰酪大豆胨液体培养基: 胰酪胨１7。0g 氯化钠５、0g 大豆木瓜蛋白酶水解物３。0ｇ 磷酸氢二钾2.5g 以上成分混合加水1000ｍl,微温溶解,滤过,调节PH使灭菌后在2５℃得pH为7.3±0。２,加入无水葡萄糖２.3ｇ或葡萄糖2。5ｇ,分装,灭菌。20~2５℃培养３~5天后无菌生长即可使用。 　 胰酪大豆胨琼脂培养基: 胨 10、0ｇ　 氯化钠5。0g　牛肉浸出粉3、０ｇ 水1000ml　葡萄糖5。Ｏg 除葡萄糖外,取上述成分混合,微温溶解,调节pH为弱碱性,煮沸,加入葡萄糖溶解后,摇 勻,滤清,调节pＨ使灭菌后在25°Ｃ得ｐH值为7.2士0、2,分装,灭菌。 麦康凯液体培养基 明胶胰酶水解物20。０g　溴甲酚紫10mg 乳糖10、０g 　水1000mｌ牛胆盐 5。0g 除乳糖、溴甲酚紫外,取上述成分,混合,微温溶解 ,调节pH 使灭菌后在25℃得pH值为7.３±0.２,加入乳糖、溴甲酚紫,分装 ,灭菌、 麦康凯琼脂培养基 明胶胰酶水解物17。0g　中性红30、0mg 胨３、０g　结晶紫1mｇ　乳糖10、０g 琼脂13。5g 脱氧胆酸钠1、5g　 水10０0ml氯化钠　５、0g 除乳糖、中性红、结晶紫、琼脂外,取上述成分,混合,微温溶解　,调节pH 使灭菌后在25℃得pH值为７、1±0、2,加入乳糖、中性红、结晶紫、琼脂,加热煮沸1分钟,并不断振摇,分装 ,灭菌。 市售成品培养基按说明书配制。 革兰氏染色试剂:有商品供应,含结晶紫染剂、碘液固染剂、酒精脱色剂、复红复染剂。 4、２器材与设备 　无菌器皿:吸管、量筒、锥形瓶或盐水瓶等。 其它器材与设备:接种针、酒精灯、玻片、细菌培养箱等。 ５　程序 42~44 42~44℃ 麦康凯琼脂平板 麦康凯液体培养基 供试品 供试液 增菌培养 42~44℃ 24~48hr 18~72hr 可疑 无菌落生长报告结果 有菌落生长 菌落形态特征 报告结果 报告结果 革兰氏染色、镜检 生化试验(IMViC) 疑似菌落纯培养 30~35℃ 18~24hr 5。１样品处理及准备 取样品10g或10ｍｌ,用ｐH7。０得无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液溶解并稀释至100mｌ,为１0％得试样、 　 当样品含有抑菌物质时,应按相应物料“抽样检验规程”所规定得方法与要求予以处理,如稀释法、离心法、中与法、薄膜过滤法等。 5.2增菌培养及分离培养。 5。2。1增菌培养:取10％得试样10mｌ(相当于样品1g或1ｍl),接种于胰酪大豆胨液体培养基(不少于100ml)中,混匀,置３0～35℃培养１8～2４小时。 5、2。2选择分离培养:取上述培养物1ml接种至100ｍl麦康凯液体培养基中,42～44℃培养２4~4８小时后,取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上,30~3５℃培养18～72小时 ５、2、３ 结果判断:若麦康凯琼脂培养基平板上有菌落生长,应进行分离、纯化及适宜得鉴定试验,确证就是否为大肠埃希菌;若麦康凯琼脂培养基平板上没有菌落生 长,或虽有菌落生长但鉴定结果为阴性,判供试品未检出大肠埃希菌 5、3对照实验 ５、3.1阳性对照试验:用阳性菌代替供试品按照5、2项操作,对照菌得加入量应不大于10０ｃfu。阳性对照试验应检出大肠埃希菌 5.3、2阴性对照试验:以稀释剂代替供试液,按照5、2项操作,阴性对照应