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白细胞分离及免疫组化
准备 :
血液标本， 白细胞分离液 （由淋巴细胞分离液配置） ，生理盐水， H2O2（3%），5%BSA，一抗，
HRP标记的二抗， DAB，苏木素。
步骤：
一、白细胞的制备
1. 取 1mL混匀的血液，加入等体积的生理盐水，轻轻混匀，将其轻轻加入等体积（ 2mL）的
白细胞分离液中， 1000r 离心 15min，收取中间的白细胞层；
2. 向收取的溶液中加入 10mL生理盐水重悬， 1000r 离心 10min，倒掉上清，再用 10mL生理
盐水重悬， 1000r 离心 10min，倒掉上清，用 2mL生理盐水重悬；
3. 重悬的白细胞滴 5 张片子，室温静置 20min，甩掉液体，吹干后，显微镜观察；
4. 将片子放入固定液中固定 5min ，置 4° 保存备用；
二、免疫组化
1. 将片子用 PBS洗 1 次， 5min，每格子滴加 100ul H 2O
（ 3%），室温静置 30min，甩干；
2. 加入新配 5% BSA溶液， 37° ， 1h；
3. 加入曲霉抗体（稀释 1:500, 1:1000 ）， 37° ， 1h， PBS洗 5 次，每次 5min；
4. 加入 HRP标记的羊抗鼠二抗（ 1:500 ） 37° ， 1h， PBS洗 5 次，每次 5min；
5. DAB 显色 5min, 自来水冲洗 5min ；
6. 苏木素染核 20min, 自来水冲洗 5min;
7. 分化冲洗 5min, 返蓝冲洗 5min
8. 组化脱水，将复染后的片子置于水中冲洗后，依次将载玻片放入 70%酒精 -80%酒精 -90%
酒精 -95%酒精 -100%酒精 -100%酒精 - 二甲苯 - 二甲苯。每个试剂中放置 2min ，最后浸泡在二
甲苯中过夜，搬到通风柜中；
9. 封片 。
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