食物过敏原蛋白的定量检验方法—科标检测.docVIP

食物过敏原蛋白定量检测方法 现在食物过敏现象越来越引发大家重视，在西方发达国家，1%～2% 成人和5%～8% 儿童全部存在食物过敏现象，其中儿童关键以牛奶和鸡蛋过敏为主，而成人关键以海鲜贝壳类食物过敏为主。有显著迹象表明，食物过敏现象在近几年有严重趋势。在世界卫生组织汇报威胁人类健康原因中，食物过敏排在第 4位，而且现在仍然没有根本有效诊疗食物过敏方法。在食品加工工业中，原料里几乎不可避免含有多种致敏蛋白，比如鸡蛋、牛奶、花生等，食物过敏患者想完全避免接触致敏物很困难。 为确保食品标签正确性和消费者安全，可靠、定量过敏原蛋白检测方法是很必需。因为食物过敏原在食品中含量较少并可能包裹于食品基质中，所以食物过敏原检测十分困难。极少许过敏原蛋白即可引发严重过敏反应，这对食物过敏原蛋白定量检测灵敏度和正确性提出了更高要求。 青岛科标检测研究院——生物试验室，拥有丰富食品过敏原检测经验，可检测原材料食品和加工食品中过敏源蛋白质，为食品生产商降低安全风险，保障食品安全、维护消 费者健康。 本文分别对基于单个蛋白(如ELISA法)和定量蛋白质组学食物过敏原定量检测方法进行综述，单个蛋白检测技术发展已经较为成熟，但尚不足以满足实际需要，而蛋白质组学方法利用，为实现对多个食品过敏原同时进行高通量、高灵敏度快速检测提供了新手段。 1、基于单个蛋白食物过敏原定量检测 基于单个蛋白食物过敏原定量检测方法关键为免疫学方法，除传统免疫学方法外，生物传感器也被应用于检测当中。现在关键过敏原定量检测方法关键包含以下几类： 1.1 酶联免疫吸附试验(ELISA法) 伴随全自动酶标分析仪普及，ELISA法在上世纪90 年代末期发展快速，其特异性和灵敏度也有了很大提升，大大扩展了其在食品检测领域中应用。ELISA法是一个免疫测定技术，基础是抗原或抗体固相化及酶标识。在最常见双抗体夹心ELISA法中，首先将抗体结合在固相载体表面，使其和样品蛋白反应，然后加入酶标识二抗来检测已结合于固相载体表面样品蛋白。结合于固相载体表面样品蛋白越多，酶标识二抗显色反应就越强，由此进行样品蛋白定量分析。 现在，在食物过敏原多种检测方法中，ELISA法是使用范围最广检测方法，多采取双抗体夹心法，含有特异性高、敏感性强、快速方便、设备投资小等优点，能够实现比较正确定量检测。依据报道，使用双抗体夹心ELISA法检测牛奶过敏原蛋白最低检出限可达 25μg/L。另外，还有用此法对大豆和花生过敏原蛋白进行检测相关报道，也能达成相当检测水平。正因为 ELISA 法很多优点，已经实施过敏原法规标准欧盟、美国、加拿大和日本等国家均推荐ELISA 法为过敏原检测方法，而且现在商业食物过敏原检测试剂盒绝大多数也全部是基于ELISA技术，在西方发达国家其应用已经比较普及。 为了深入提升ELISA法灵敏度和正确度，多年新兴了一个将ELISA和电感耦合等离子质谱(ICP-MS)相结合方法，即ELISA-ICP-MS 法，在此方法中，用稳定同位素替换酶对二抗进行标识，然后可经过质谱进行定量分析。依据报道，用此法能够在 1g 谷类食品混合物中检测出2μg 花生过敏原。 1.2 RAST/EAST及RAST/EAST抑制试验 自从IgE 成功纯化及抗IgE 抗体成功制备后，放射过敏原吸附试验(RAST)和酶标识过敏原吸附试验(EAST)检测技术就建立起来，其基础原理全部是在固相载体上使特异性IgE 抗体和食物过敏原结合，然后进行检测，现在已是一个标准化食物过敏原检测方法，使用广泛。 在此基础上又建立了放射过敏原吸附抑制试验(RAST抑制试验)和酶标识过敏原吸附抑制试验(EAST抑制试验)，可对食物过敏原进行定量测定，其在食物过敏原检测中取得了广泛应用。RAST/EAST 抑制试验优点是能够实现全自动操作，避免了人为操作带来误差；缺点是对人血清依靠，人血清个体差异性限制了这两种方法在食物过敏原定量检测中应用。 1.3 火箭电泳(RIE)法 RIE 法是将含有已知抗体琼脂制成琼脂板，冷凝后，在液板上阴极端挖一排小孔，孔中分别加入一定量待检样品及不一样稀释度标准抗原，进行电泳。抗原向阳极移动，并和抗体结合。在抗原、抗体百分比合适部位形成锥形沉淀峰，其形状如火箭，该峰高度和抗原量成正比，可快速测出标本中过敏原含量。 据报道用此方法检测了不一样食品中鸡蛋、牛奶和花生蛋白含量。RIE 优点是检测速度快，缺点是制胶操作和染色过程比较繁琐。 1.4 组胺释放试验 致敏靶细胞被食品过敏原蛋白激发后会释放出组胺，然后用放射免疫法、荧光测定法检测组胺含量，再和适宜参考进行比较，就能够对食品过敏原蛋白进行测定。其中阳性参考和阴性参考通常分别为抗IgE 抗体和样品介质，这么能够排除在试验中非特异性组胺释放造成影响。 现已经有经过体外组