组织RT-PCR注意事项.docxVIP

抽提 RNA 都是为了得到其 mRNA ，而 mRNA 和组织的状态密切相关，因此需要超低温的状态，一般选择用液氮保存组织。而且去的时候要尽可能的新鲜， 动作要快，取后立即放入液氮罐 中。 提取 RNA 前要对脑组织进行研磨，切记要在液氮中进行，也是为了防止 rna 的降解。研磨要充分，使组织块变小。 加入 trizol 后要充分吹打开，目的是使组织中的核蛋白体，多糖等与 rna 分离。 其次是注意外源性的 rna 酶污染，操作全过程要戴口罩，手套。操作速度要快，冰上进行。 我做过大鼠下丘脑组织的 RT-PCR，在动物房将组织取好先放在 RNa －free 的 EP 管中，放在冰盒内，然后再转移到实验室的－ 70°冰箱内，在抽 RNA 的时候，脑组织最好要氯仿抽提两次， 这个是我在别的地方看到的，但是真的很好用，可以改善 RNA 抽提的质量。 用生理盐水或 PBS 冲洗掉血液，分切成 50-100mg 大小的组织块，早点把提 RNA 的试剂盒买过来就可以根据说明书加入变性液中（ ep 管内），－ 80 储存，到时候拿出来组织就很容易撵碎了。如果试剂盒没到， 那就直接放在 EP 管中， 提 RNA 的时候再拿出来再加也可以。 就是组织可能会不容易撵碎一些。 我觉得你可以用高压过的 EDPC 处理的水进行清洗 （ 2－ 3 次），后迅速切成合适的大小的组织 （具体大小与 R