淀粉和纤维素含量的测定.docxVIP

淀粉含量的测定 （旋光法 ） （一）实验目的 熟习旋光仪的使用方法。 了解旋光仪测定淀粉的原理并掌握其具体方法。 （二）实验原理 淀粉 （starch） 是植物的主要能量贮藏物质，主要存在于种子、块根和块茎中。淀粉不仅 是重要的营养物质，并且在工业上的应用也很广泛。 将磨细的含淀粉样品与酸性氯化钙溶液共煮， 可使样品中淀粉轻度水解， 同时由于钙离 子与淀粉分子上的羟基络合， 使淀粉分子充分地分散到溶液中， 成为淀粉溶液。 淀粉分 子具有不对称碳原子，因而具有旋光性，利用旋光仪测定淀粉溶胶的旋光度 （a,）旋光 度的大小与淀粉的浓度成正比，据此可以求出淀粉含量。 应注意的是）酸性氯化钙溶液必须保持 pH 值 2.30 ）密度 1.30 ）加时间的长短也要控 制在一定范围，以保证各种不同来源的淀粉溶液的比旋度］ a］恒定不变（20 C ）。样品 中其他旋光性物质 （如糖分 ）必须预先除去。 （三） 仪器、原料和试剂 仪器 植物样品粉碎机、离心机、分析天平； 粗天平、旋光仪及附件、三角瓶、分样筛 （100 目）、布氏漏斗、抽滤瓶及真空泵、离心管、小电炉。 原料 面粉或其他风干样品 试剂 醋酸 —氯化钙溶液： 500g氯化钙溶于 600mL蒸馏水中，过滤至澄清，用比重计在 20 C条件下调节比重 1.3 左右）再滴加冰乙酸调 pH 为 2.3 。 30 ％ZnSO 4 溶液 15 ％K4Fe（CN） 溶液 （四） 操作步骤 样品准备 （1） 称样脱脂：将样品风干、研磨）通过 100 目筛）精确称取约 2.5g 样品细粉 （要求含 淀粉约 2g） ）置于离心管内）加乙醚数 mL 到离心管内）用细玻棒充分搅拌）离心）倾 出上清液）再加入乙醚如此操作数次）以去除样品的大部分油脂、色素等成分 （因油脂 的的存在会使以后淀粉溶液的过滤困难 ）。 收集上清液以备回收乙醚。大多数谷物样品含脂肪较少）可免去这个脱脂手续。 （2） 抑制酶活性： 加含有氯化高汞的乙醇溶液 10mL 到离心管内） 充分搅拌） 然后离心） 倾去上清液）得到沉淀物。 （3） 脱糖：加 80％乙醇 10mL 到离心管中） 充分搅拌以洗涤沉淀物 （每次都用同一玻棒 ）） 离心）倾去下清液。重复洗涤数次以去除可溶性糖分。 溶提淀粉 （1） 加醋酸－氯化钙：先用醋酸氯化钙溶液约 10mL 加到装有脱脂样品的离心管中）搅 拌后全部倾入 250mL 三角瓶内） 再用醋酸氯化钙溶液 50mL 分数次洗涤离心管） 洗涤 液并入三角瓶内）搅拌玻棒也转移到三角瓶内。 （2） 煮沸溶解：先用蜡笔标记液面高度）直接置于加有石棉网的小电炉上）在 5min 内 快速煮沸，保持沸腾 15?17min，立即取下三角瓶，置流水中冷却。煮沸过程中要时 加搅拌并调节温度）防止烧焦或泡沫涌出瓶外）必要时加水保持液面高度。 沉淀杂质和定容 (1) 加沉淀剂： 将三角瓶内的水解液转入 100mL 容量瓶， 用醋酸氯化钙溶液充分洗涤三 角瓶瓶，并入容量内，加 30 ％ ZnSO 41mL 混合后，再加 15 ％ K 4Fe(CN)1mL ，用水稀 释至接近刻度时，加 95 ％乙醇数滴以破坏泡沫，然后稀释到刻度，混合、静置，以使 蛋白充分沉淀。 (2) 过滤：布氏漏斗 (加一层滤纸 )抽气过滤。先倒上清溶液约 10mL 于漏斗滤纸上使完 全湿润，待溶液流干后，弃去滤液，再倒溶液进行过滤，用干燥的容器接受此滤液，收 集约 50mL ，供测定之用。 测定旋光度 以空白液 (乙酸 —氯化钙溶液：蒸馏水 =6 ：4)调旋光仪零点，再将旋光测定管装满滤液， 小心地按照旋光仪使用说明，进行旋光度的测定。 计算 淀粉 %=( a*100)/(L*W*203*(1-H))*100 式中： a—用钠光时观测到的旋光度； 203 — 20 C时淀粉的比旋度； L—旋光管长度(dm); W —样品重量 (g)； H —样品水分含量。 也可以不用上列公式计算，改用工作曲线来求得淀粉含量，这样准确度高些 纤维素含量的测定 实验目的 纤维素是植物细胞壁的主要成分之一， 纤维素含量的多少， 关系到植物细胞机械组织发 达与否。因而影响作物的抗倒伏，抗病虫害能力的强弱。 测定粮食、蔬菜及纤维作物产 品中纤维素含量是鉴定其品质好坏的重要指标。 实验原理 纤维素(cellulose)为葡萄糖残基组成的多糖，在酸性条件下加热能分解成 葡萄 糖。葡萄糖在强酸作用下， 可脱水生成糠醛类化合物。糠醛类化合物与蒽酮 脱水缩合，生成黄色的糠醛衍生物。颜色的深浅可间接定量测定纤维素含量。 仪器、实验材料和试剂 仪器 小试管、量筒、烧杯、移液管、容量瓶、布氏漏斗、分析天平、水浴锅、电炉、分光光 度计。 实验材料 烘干的米、面粉或风干的棉、麻纤维。 试剂 1.60 % H2SO