第八章超敏反应及其疾病.pptVIP

免 疫 印 迹 法 示 意 图 第二节 淋巴细胞 的测定 检测各群体淋巴细胞的数量与功能是观察机体免疫状态的重要手段。外周血是病人主要的检测标本，但仅代表再循环的淋巴细胞。实验动物还可取胸腺、脾、淋巴结等作为标本进行检查。 (1) 抗凝 静脉血 (2) 加等量NS (4) 密度梯度离心 血浆 分离液 RBC PBMC PMN (3) 混匀后，缓慢加于分离液上 一、淋巴细胞类型和数目的测定 1、花结试验：E花结试验可用于检测T细胞数目。EA花结试验可用于检测B细胞数目。 2、免疫荧光法：常采用间接免疫荧光法。 3、流式细胞术：借助流式细胞仪（FCM)。 花结试验示意图 T细胞功能测定 体外法 ：T细胞增殖试验 形态学检查 3H-TdR掺入法 MTT法 体内法 ： 用生物抗原或化学抗原作皮内试验。 OT-PPD皮试 SD-SK皮试 培养液 3H-TdR PHA 淋巴细胞 全血 分层液 离心 过滤 测量放射性 淋巴细胞增殖试验（3H-TdR掺入法）示意图 靶细胞 51Cr 洗涤 去除游离的51Cr 效应细胞 测量上清液中释放的51Cr 混合培养4-6小时 细胞毒试验（51Cr释放法）示意图 酶联免疫斑点法（Enzyme-Linked Immunospot, ELISA) 是在ELISA的基础上建立的检测抗体生成细胞及细胞因子产生细胞的方法。 CK抗体包被的反应板 CK 抗原包被的反应板 加入淋巴细胞 加入酶标记二抗 加入底物 检测抗原特异性B细胞 加入底物 T细胞产生CK的检测 加入淋巴细胞 加入酶标的CK抗体 淋巴细胞转化试验（形态学示意图） 原理：人T细胞表面有PHA或ConA受体，T细胞在体外受PHA或ConA的刺激后能转化为体积较大、代谢旺盛、且能进行分裂的淋巴细胞，以此测定T细胞的功能。 PHA刺激 48~72小时 淋巴细胞增殖—3H-TdR掺入法 原理：将单个核细胞中加入PHA共同培养，在终止培养前8~15小时加入氚标记的胸腺嘧啶核苷（3H-TdR), 经β-液体闪烁仪检测淋巴细胞DNA的3H-TdR掺入量，推测淋巴细胞增殖的程度。 MTT(四甲基偶氮唑盐）法 原理：在细胞培养终止前数小时加入MTT，活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶分解MTT产生蓝色甲攒（Formazan)沉积于细胞内或细胞周围，形成甲攒的量与细胞增殖程度成正相关。 细胞毒试验 CTL介导的细胞毒试验：常采用51Cr释 放法 NK细胞的细胞毒试验：常用的靶细胞 为K562细胞 （一）传统疫苗 1、灭活疫苗（死疫苗）：是选用免疫原性强的病原微生物，经人工大量培养后，用理化方法灭活后制成。常用的死疫苗有乙型脑炎疫苗、狂犬疫苗、霍乱疫苗等。 2、减毒活疫苗：用减毒或无毒力的活病原微生物制成的称为活疫苗，又称为减毒活疫苗。常用的活疫苗有卡介苗、麻疹疫苗、风疹疫苗、脊髓灰质炎疫苗等。 2、合成肽疫苗：根据有效免疫原的氨基酸序列设计合成的免疫原性多肽交联载体疫苗。 3、结合疫苗 将荚膜多糖的水解物连接于白喉类毒素而制备的疫苗。目前已获准的结合疫苗有流感杆菌、脑膜炎萘瑟菌、肺炎链球菌疫苗等。 ４、重组抗原疫苗 是利用DNA重组技术制备的只含保护性抗原的纯化疫苗。不含活的病原体及病毒核酸。安全有效，目前获准生产的有乙肝疫苗、口蹄疫疫苗和莱姆病疫苗。 ５、重组载体疫苗：将编码病原体有效免疫原的基因插入减毒的病毒载体基因中，接种后，随疫苗株在体内增殖，而表达相应抗原。 ６、DNA疫苗：用编码病原体有效免疫原基因的重组体直接接种，在体内可表达保护性抗原，从而诱导机体产生特异性免疫，此为DNA疫苗。 ７、转基因植物疫苗：用转基因方法将编码有效免疫原的基因导入可食用植物细胞的基因组中，免疫原即可在植物的可食用部分稳定表达和积累，人和动物通过摄食达到免疫接种的目的。常用植物有番茄、马铃薯、香蕉等。 二、人工被动免疫 是给机体输入抗体，使机体获得特异性免疫力。输入抗体后立即获得免疫力，但维持时间短，一般为2-3周，临床上主要用于治疗或紧急预防。 1、抗毒素： 抗毒素主要用于某些细菌外毒素所致疾病的治疗和紧急预防