小麦水通道蛋白基因的克隆、表达分析与转化.pdfVIP

摘 要 摘 要 小麦是人类的三大主粮作物之一，其产量与品质与世界粮食安全息息相关。但小 麦在生长过程中面临着多种逆境胁迫。水通道蛋白是一类能够高效并特异性转运水分 子的膜内在蛋白，在调节水分的跨膜运输方面起到重要作用。此外，水通道蛋白在植 物应对干旱、盐、低温等多种逆境胁迫的过程中发挥了重要的作用。但由于小麦基因 组的庞大以及异源六倍体的原因，对小麦水通道蛋白的研究并不深入。本研究通过PCR 扩增的方法从小麦品种 KN199 中获得了小麦水通道蛋白基因TaTIP1-1c 与 TaTIP3-1b 分别位于4BL 和1DL 上的拷贝。以这两个水通道蛋白基因为研究对象取得了以下进展： 1、通过生物信息学分析工具对 TaTIP1-1c 进行了初步分析。分析结果表明： TaTIP1-1c 基因编码区全长 753bp，共编码 250 个氨基酸。TaTIP1-1c 蛋白分子量为 25755.92 Da，具有6 个跨膜域，无信号肽，为非分泌型、弱酸性、稳定型、疏水性蛋 白。二级结构由26.8% 的阿尔法螺旋，25.6% 的延伸直链和 47.6% 的不规则卷曲构成。 三级结构模型显示该蛋白可形成一个同源四聚体，系统发育分析显示小麦与粗山羊草 的亲缘关系较近。启动子区顺式作用元件分析显示该基因具有多个调控元件，多数与 响应植物激素（脱落酸，茉莉酸甲酯，生长素）和光照有关。 2 、通过生物信息学分析工具对TaTIP3-1b 基因进行了初步分析。分析结果表明： TaTIP3-1b 基因编码区长度为 792bp，共编码263 个氨基酸。TaTIP3-1b 蛋白分子量为 27550.09Da，具有 6 个跨膜域，无信号肽，为非分泌型、弱碱性、稳定型、疏水性蛋 白。二级结构由34.22%的阿尔法螺旋，21.29%的延伸直链，3.8% 的β-转角和 40.68% 的不规则卷曲构成。三级结构显示该蛋白同样以同源四聚体形式存在。启动子区顺式 作用元件分析显示该基因具有多个调控元件，多数与脱落酸，光照有关。 3 、通过实时荧光定量 PCR 技术进行 TaTIP1-1c 基因的表达分析。结果表明 TaTIP1-1c 基因在灌浆期小麦品种 KN199 不同组织部位中均有表达，其中在茎中表达 量最高，在根中表达量最少。不同胁迫下TaTIP1-1c 基因在灌浆期小麦叶片中的表达分 析显示：该基因在干旱胁迫下表达下调，在盐胁迫下表达上调，在脱落酸（ABA ）和 过氧化氢（H O ）处理下表达上调。干旱胁迫下 TaTIP1-1c 基因在幼苗期和孕穗期小 2 2 麦的表达分析显示：该基因在幼苗期的根中表达量大幅上调，在幼苗期叶片中表达下 调；在孕穗期小麦的穗部与叶片中表达量均上调。推测该基因参与小麦响应逆境胁迫 的过程。 4 、从小麦品种KN199 中获得了TaTIP1-1c 与TaTIP3-1b 基因分别位于4BL 和1DL 上的拷贝。构建了 TaTIP1-1c 与 TaTIP3-1b 基因的过表达载体。利用基因枪法，将 TaTIP1-1c 与TaTIP3-1b 基因的过表达载体转化至小麦幼胚内，并通过组织培养获得转 I 西北农林科技大学硕士学位论文 基因阳性植株。 关键词：小麦；转基因，生物信息学分析；表达分析；水通道蛋白 II 主要符号中英文对照表 主要符号中英文对照表 缩略符号 中文名称 英文名称 Amp 氨苄青霉素 Ampicillin bp 碱基对