制备型加压色谱技术教学PPT课件.pptx

三、制备型加压色谱技术;制备色谱;制备所需纯化合物的数量取决于其用途： 微克级至毫克级样品一般用于波谱测试确定结构 毫克级样品可用于进一步的结构鉴定，化学反应和某些生物活性测试，克数量级样品可用于进一步生物活性测试、药理、毒理实验，作为合成或半合成工作原料及标准品。 此外，所介绍的制备液相色谱技术也可用于分离超纯标准品，标记化合物，痕量杂质，药物分解产物及代谢产物，还可用于生物高分子（蛋白质、多糖等）及多肽类化合物的分离。 ;一、基本原理;基本原理;加压液相色谱中可发挥下列两方面的作用（a和b）或其中之一：;制备色谱;二、常规分离方法的建立;为选择制备型加压液相色谱的分离条件可采用下列操作步骤：;操作步骤;操作步骤;操作步骤;操作步骤;三、色谱柱;色谱柱;色谱柱;常用固定相（填料）可分为液－固（吸附），例如硅胶等，液－液分配如C18, C8, C4键合相等，凝胶和离子交换[前者为排阻色谱，后者为阳离子、阴离子交换色谱（强酸、弱酸、强碱、弱碱等）], 另外还有NH2柱等。 选择固定相还应注意以下几点： 颗粒大小及其孔径 操作压力 ;恰当地综合考虑上述因素，才能得到好的分离效果。增加色谱柱长度可提高分辨率，但需施加更大压力；同样减小固定相颗粒，可增加分离度和样品载样量但也增加操作压力。 一般来说，球形颗粒优于不规则形状颗粒。它具有较高机械强度，不易破碎，装柱重现性好，可增加样品在柱中的渗透性，峰对称较好、寿命长等优点。但球形固定相价格较高。 柱层析颗粒在40－63?m较易于干法装柱，载样量大，价格适中，能进行有效分离，最适宜颗粒大约为15?m左右，颗粒减小增加N, Rs，但装柱时需更高压力。 HPLC制备柱中颗粒大小为10?m，5?m，3?m，1.8?m等，其分离度好，易于纯化样品，对众多天然药物样品分离、纯化和制备是一条较好途径。（μm≈14832.4/目数）;装柱方法一般来说，颗粒度大，干法（顿击法）装柱（20－30?m），小于此颗粒装柱较困难，一般采用湿法装柱（即匀浆装柱）。匀浆装柱需一个高压装置、匀浆罐、与填料比重相近溶剂（二氧六环、四氯化碳），其方法根据柱子内径和长度算出装填量，加入溶剂，超声，使成均匀匀浆（近透明），将柱子上螺丝卸下（经清洗、烘干、干净空柱），连到匀浆罐，然后将匀浆到入匀浆罐，拧紧灌盖，连接气动泵螺丝，一瞬间压下匀浆（400公斤≈40MPa），匀浆中溶剂经柱子从柱下口滤网快速滤出，而填料均匀下沉至柱中，再补打一次高压（400公斤），放置半小时直到打紧为止。柱装好后，放入高效液相色谱仪测试柱效和分离度，柱子即制备完成。以上是装分析柱方法，制备柱也可用同法装柱。;四、流动相的选择;流动相的选择;五、加样;加样;加样量如何放大 ;不同规格柱上样品量;很多因素可影响制备柱的容量。下列一些影响因素需加以考虑：;现常用上样方法： ;上样方法;流速的选择;梯度分离时间(GD);六、被分离色谱图的收集方法;被分离色谱图的收集方法;被分离色谱图的收集方法;;被分离色谱图的收集方法;被分离色谱图的收集方法;七、高效液相制备色谱仪器;高效液相制备色谱仪器;高效液相制备色谱仪器; 八、制备色谱新技术; 制备色谱新技术; 制备色谱新技术; 制备色谱新技术; 制备色谱新技术; 制备色谱新技术;被分离色谱图的收集方法