聚合酶链反应（PCR）检验实验室检查要点指南（2016版）.pdf

聚合酶链反应（PCR ）检验实验室 检查要点指南（2016 版） 聚合酶链反应检验实验室是指通过基因扩增的方式检测特定的 DNA 或 RNA 的检验实验室。聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction ，PCR ）是一种在 体外特异性扩增靶DNA 序列的技术，其基本过程为模板双链DNA 的变性、引物与 模板 DNA 的退火和在DNA 聚合酶引导下的链延伸反应三个阶段的多次循环。每 一次循环后的扩增产物均可作为下一轮循环的模板，理论上，扩增产物量呈指数 n 形式上升，即经过n 个循环后，产物量增加到2 倍。PCR 试剂操作简单，短时间 内在体外可获得数百万个特异靶DNA 序列的复制，为临床疾病的诊断、治疗监测 和预后评估提供了一种极有帮助的实验室辅助手段。 PCR 检验实验室是 PCR 试剂生产企业在产品检验过程中不可缺少的工作环 境，其环境控制水平和质量管理水平直接影响着最终产品是否合格，能否放行。 由于该产品本身的特殊性，《医疗器械生产质量管理规范附录体外诊断试剂》、《医 疗器械生产质量管理规范体外诊断试剂现场检查指导原则》条款中，明确对PCR 试剂的生产和检验环境做出规定。此外现行卫生行业的法规、标准以及相关文献 中对于PCR 检验实验室均作出规定，主要涉及 《全国临床检验规程》（第三版）、 《医疗机构临床基因扩增管理办法》（卫办医政发〔2010〕194 号）、《医疗机构 临床基因扩增检验实验室工作导则》及 《临床诊断中聚合酶链反应（PCR ）技术 的应用》（WS/T 230-2002 ）等行业标准的相关要求。 本检查指南旨在帮助北京市医疗器械监管人员增强对PCR 检验相关过程的 认知和把握，指导全市医疗器械监管人员对PCR 检验实验室设计建设与质量控制 的监督检查工作。同时，为PCR 试剂生产企业在PCR 检验实验室的设计建造和管 理要求提供参考。 当国家相关法规、标准、检查要求发生变化时，应当重新讨论以确保本检 查指南持续符合要求。 一、适用范围 本检查指南可作为北京市食品药品监督管理局组织、实施的体外诊断试剂 产品注册质量管理体系现场核查、《医疗器械生产许可证》现场核查、医疗器械 生产监督检查等各项涉及PCR 检验实验室检查的参考资料。 基因测序检验实验室等涉及PCR 试剂的相关部分应当参照本检查指南执行。 二、检查要点 （一）现场查看生产企业PCR 检验实验室布局 生产企业应当提供PCR 检验实验室设计方案和/或平面设计图（应当标明风 向或压差梯度）。 1.PCR 检验实验室与 PCR 试剂生产区域应当在各自独立的建筑物或空间内， 保证空气不直接联通，防止扩增时形成的气溶胶造成交叉污染。 2.原则上PCR 检验实验室应当设置以下区域：试剂储存和准备区、标本制备 区、扩增区、扩增产物分析区。根据使用仪器的功能，区域可适当合并。若使用 实时荧光定量PCR 仪且不需要进行后续产物分析工作，扩增区、扩增产物分析区 可合并。若使用样本处理、核酸提取及扩增检测为一体的自动化分析仪，则标本 制备区、扩增区、扩增产物分析区可合并。 3.各区域在物理空间上应当完全相互独立，各区域无论是在空间上还是在使 用中，应当始终处于完全的分隔状态。不应当只是形式上的分区，不应当是一个 区域嵌套一个区域。 4.各区域不应当有空气的直接相通。扩增区与扩增产物分析区各区域宜采用 独立直排方式出风。采用空调机组方式的，PCR 检验实验室应当具备独立空调机 组；同时应当考虑停机后各房间空气连通的可能性，采取必要的控制措施。 5.按照试剂储存和准备区→标本制备区→扩增区→扩增产物分析区方向空 气压力应当以递减的方式进行，使得PCR 检验实验室的空气流向应当按照试剂储 存和准备区→标本制备区→扩增区→扩增产物分析区方向进行，防止扩增产物顺 空气气流进入扩增前的区域。空气流向应当为单向，禁止下游污染上游。应当设 置合理的压差梯度，并安装压差监测装置，以有效证明空气流向，压差梯度不宜 低于5 帕。 6.设置缓冲间的，缓冲间内通向内实验室和走廊的门应当安装连锁装置或采 取相应措施，避免出现两个门同时打开的情况。 7.各区间若设置传递窗，应当为双侧开门，要求密封严实，并且两侧的门应